紫外-可見分光光度法

點擊次數(shù)：1298 發(fā)布時間：2014-11-19

紫外-　　紫外--可見分光光度法：是根據(jù)物質(zhì)分子對波長為200-760nm這一范圍的電磁波的吸收特性所建立起來的一種定性、定量和結(jié)構(gòu)分析方法。操作簡單、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好。波長長（頻率小）的光線能量小，波長短（頻率大）的光線能量大。分光光度測量是關(guān)于物質(zhì)分子對不同波長和特定波長處的輻射吸收程度的測量。
　　描述物質(zhì)分子對輻射吸收的程度隨波長而變的函數(shù)關(guān)系曲線，稱為吸收光譜或吸收曲線。紫外-可見吸收光譜通常由一個或幾個寬吸收譜帶組成。zui大吸收波長（λmax）表示物質(zhì)對輻射的特征吸收或選擇吸收，它與分子中外層電子或價電子的結(jié)構(gòu)（或成鍵、非鍵和反鍵電子）有關(guān)。朗伯-比爾定律是分光光度法和比色法的基礎(chǔ)。這個定律表示：當(dāng)一束具有I0強度的單色輻射照射到吸收層厚度為b，濃度為c的吸光物質(zhì)時，輻射能的吸收依賴于該物質(zhì)的濃度與吸收層的厚度。其數(shù)學(xué)表達(dá)式為： 式中的A叫做吸光度；I0為入射輻射強度；I為透過吸收層的輻射強度；（I／I0）稱紫藤為透射率T；ε是一個常數(shù)，叫做摩爾吸光系數(shù)，ε值愈大，分光光度法測定的靈敏度愈高。
　　紫外-可見分光光度計由5個部件組成：    ①輻射源。必須具有穩(wěn)定的、有足夠輸出功率的、能提供儀器使用波段的連續(xù)光譜，如鎢燈、鹵鎢燈（波長范圍350～2500納米），氘燈或氫燈（180～460納米），或可調(diào)諧染料激光光源等。②單色器[1]。它由入射、出射狹縫、透鏡系統(tǒng)和色散元件（棱鏡或光柵）組成，是用以產(chǎn)生高純度單色光束的裝置，其功能包括將光源產(chǎn)生的復(fù)合光分解為單色光和分出所需的單色光束。③試樣容器，又稱吸收池。供盛放試液進行吸光度測量之用，分為石英池和玻璃池兩種，前者適用于紫外到可見區(qū)，后者只適用于可見區(qū)。容器的光程一般為0.5～10厘米。④檢測器，又稱光電轉(zhuǎn)換器。常用的有光電管或光電倍增管，后者較前者更靈敏，特別適用于檢測較弱的輻射。近年來還使用光導(dǎo)攝像管或光電二極管矩陣作檢測器，具有快速掃描的特點。⑤顯示裝置。這部分裝置發(fā)展較快。較的光度計，常備有微處理機、熒光屏顯示和記錄儀等，可將圖譜、數(shù)據(jù)和操作條件都顯示出來。
　　儀器類型則有：單波長單光束直讀式分光光度計，單波長雙光束自動記錄式分光光度計和雙波長雙光束分光光度計。
　　應(yīng)用范圍包括：①定量分析，廣泛用于各種物料中微量、超微量和常量的無機和有機物質(zhì)的測定。②定性和結(jié)構(gòu)分析，紫外吸收光譜還可用于推斷空間阻礙效應(yīng)、氫鍵的強度、互變異構(gòu)、幾何異構(gòu)現(xiàn)象等。③反應(yīng)動力學(xué)研究，即研究反應(yīng)物濃度隨時間而變化的函數(shù)關(guān)系，測定反應(yīng)速度和反應(yīng)級數(shù)，探討反應(yīng)機理。④研究溶液平衡，如測定絡(luò)合物的組成，穩(wěn)定常數(shù)、酸堿離解常數(shù)等。

 
熒光分析法　　利用某些物質(zhì)被紫外光照射后所發(fā)生的能反映出該物質(zhì)特性的熒光， 
　　可以進行定性或定量分析的方法。 
　　特點：靈敏度更高 10-10-10-12g/ml，應(yīng)用不如UV廣泛。
　　應(yīng)用：①直接熒光光度法
　　      ②作為HPLC的檢測器（用的多）