一般細胞培養(yǎng)液的pH在7.2-7.4之間。由于碳酸鹽pH緩沖系統(tǒng)是一種生理pH緩沖系統(tǒng)(它是人體血液中重要的pH緩沖系統(tǒng))，大多數(shù)培養(yǎng)液用它來保持穩(wěn)定的pH。用粉末配制培養(yǎng)液時，常常需要加入一定量的碳酸氫鈉。
對大部分以碳酸鹽作為pH緩沖系統(tǒng)的培養(yǎng)液而言，以為了維持穩(wěn)定的pH，培養(yǎng)箱中的二氧化碳需要維持在3-10%之間，以保持培養(yǎng)液中溶解的二氧化碳的濃度。同時細胞培養(yǎng)的器皿需要一定程度的透氣，以便于氣體的交換。那么是否采用其他pH緩沖系統(tǒng)就不需要二氧化碳培養(yǎng)箱了呢?人們發(fā)現(xiàn)由于空氣中的二氧化碳濃度很低，如果細胞不在二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)液中的碳酸氫根就會被耗盡，這樣會影響細胞的正常生長。所以大多數(shù)動物細胞的培養(yǎng)，都是需要二氧化碳培養(yǎng)箱的。
細胞培養(yǎng)液中常附加其他的pH緩沖系統(tǒng)，比如hepes緩沖液，來增加pH緩沖能力。hepes在pH7.2-7.4之間有很強的緩沖能力，當透氣的培養(yǎng)器皿被拿到二氧化碳培養(yǎng)箱外面的時候，由于空氣中二氧化碳濃度很低，培養(yǎng)液中碳酸鹽緩沖液就會失去效果，這時候hepes緩沖液就能繼續(xù)保持pH的穩(wěn)定。
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