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　　1　實(shí)驗(yàn)部分
 

　　1.1　試劑與儀器
 

　　蘿卜紅色素; 天竺葵232O2葡萄糖苷標(biāo)準(zhǔn)品(純度大于97% , Sigma公司) ; 甲醇、乙腈(色譜純) ; 甲酸(分析純) ; 超純水(電阻率1812 MΩ ·cm) 。液相色譜儀(UV檢測(cè)器)
 

　　1.2　色譜條件
 

　　液相色譜柱: Ultimate XB2C18色譜柱(416 mm ×250 mm ×5μm) ; 流動(dòng)相: 乙腈- 5%甲酸溶液(體積比24 ∶76) ; 流速: 110 mL /min; 柱溫: 25 ℃; 進(jìn)樣量: 10μL; 紫外檢測(cè)波長(zhǎng): 525 nm。
 

　　1.3　標(biāo)準(zhǔn)品與樣品溶液的制備
 

　　稱(chēng)取天竺葵232O2葡萄糖苷標(biāo)準(zhǔn)品510 mg, 用甲醇溶解并定容于5 mL容量瓶中, 得110 g/L標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液, 低溫保存, 備用。取一定量蘿卜紅色素樣品, 用甲醇溶解并定容于10 mL 容量瓶中, 得待測(cè)樣品溶液, 低溫保存,備用。
 

　　1.4　測(cè)定方法
 

　　分別吸取0105、011、012、015、110 mL天竺葵232O2葡萄糖苷標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液, 用甲醇定容于5 mL容量瓶中配成系列不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液, 在優(yōu)化測(cè)定條件下進(jìn)行色譜分析, 根據(jù)峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品測(cè)定: 取經(jīng)0145μm微孔膜過(guò)濾的蘿卜紅色素溶液10μL, 注入液相色譜儀, 比較樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的液相色譜圖, 根據(jù)組分保留時(shí)間進(jìn)行定性分析, 與標(biāo)準(zhǔn)樣品的峰面積及標(biāo)準(zhǔn)工作曲線比較進(jìn)行定量分析。
 

　　2　結(jié)果與討論
 

　　2.1　色譜條件的選擇
 

　　采用多組洗脫溶劑體系(乙腈- 甲醇、乙腈- 水、甲醇- 水)分離樣品, 并考察了pH值對(duì)樣品分離度的影響。由于天竺葵232O2葡萄糖苷中的酚羥基在水溶液中易發(fā)生電離, 極性增強(qiáng), 在固定相表面形成雙重保留機(jī)理, 色譜峰拖尾嚴(yán)重, 定量分析誤差較大。因此選擇在流動(dòng)相中加入甲酸調(diào)節(jié)pH 值。當(dāng)甲酸體積分?jǐn)?shù)為10%、9%、7%、5%、3%時(shí), 天竺葵232O2葡萄糖苷色譜峰對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間分別為2132、2167、2197、3160、4191 min。結(jié)合峰形和保留時(shí)間, 確定甲酸體積分?jǐn)?shù)為5% , 此時(shí)流動(dòng)相的pH值不小于3。在此色譜條件下, 可以明顯改善色譜峰的峰形。
 

　　以乙腈- 甲醇為流動(dòng)相, 在不加酸的情況下, 色譜峰較寬, 樣品未*分離導(dǎo)致保留時(shí)間較短且峰形不佳。流動(dòng)相為甲醇- 水時(shí), 甲醇的洗脫能力不強(qiáng), 保留時(shí)間延長(zhǎng),天竺葵232O2葡萄糖苷與其他組分的峰重疊, 分離效果差,峰形不對(duì)稱(chēng), 基線明顯漂移。流動(dòng)相為乙腈- 水時(shí), 隨著流動(dòng)相中甲酸水溶液比例的增加, 天竺葵232O2葡萄糖苷峰拖尾和峰形不對(duì)稱(chēng)問(wèn)題得到改善, 可獲得理想的保留時(shí)間和分離效果。結(jié)果表明: 以乙腈- 5%甲酸溶液(24 ∶76) 為流動(dòng)相獲得了較優(yōu)的色譜分離效果。
 

　　圖1為優(yōu)化條件下, 天竺葵232O2葡萄糖苷標(biāo)樣及蘿卜紅色素樣品的液相色譜圖。
 

2.2　線性方程、線性范圍及檢出限
 

　　在優(yōu)化條件下測(cè)定對(duì)照品系列標(biāo)準(zhǔn)溶液, 以峰面積Y為縱坐標(biāo), 質(zhì)量濃度X ( g/L)為橫坐標(biāo), 計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線方程、線性范圍和檢出限。線性回歸方程為Y = 8161 ×10- 8 X - 01004 8, 相關(guān)系數(shù)r = 01999。實(shí)驗(yàn)表明, 天竺葵232O2葡萄糖苷在0101～0110 g/L范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。將標(biāo)準(zhǔn)溶液逐級(jí)稀釋進(jìn)樣, 測(cè)其峰高響應(yīng)值及基線噪音強(qiáng)度, 以3倍信噪比計(jì)算檢出限為01002 5 g/L。
 

　　213　方法回收率、精密度及穩(wěn)定性
 

　　吸取已知含量的蘿卜紅色素樣品溶液, 加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液進(jìn)行測(cè)定, 回收率見(jiàn)表1。平均加標(biāo)回收率為97%～100% , 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為112% ( n = 6) , 方法的準(zhǔn)確度和精密度均可滿(mǎn)足測(cè)定要求。
 

　　取相同的蘿卜紅色素樣品溶液在“112”條件下進(jìn)樣10μL, 每2 h進(jìn)樣1次, 共進(jìn)樣5次, 測(cè)得天竺葵232O2葡萄糖苷的含量逐漸下降。其原因主要是由于蘿卜紅色素樣品溶液暴露在室溫條件下, 天竺葵232O2葡萄糖苷被氧化造成其含量逐漸減少[ 14 - 15 ] 。因此, 在花色苷的檢測(cè)過(guò)程中, 應(yīng)盡量保證天竺葵232O2葡萄糖苷標(biāo)準(zhǔn)溶液與待測(cè)樣品溶液現(xiàn)做現(xiàn)配, 并在低于- 16 ℃條件下保存。
 

　　3　結(jié)　論
 

　　本文建立了蘿卜紅色素中天竺葵232O2葡萄糖苷含量的液相色譜檢測(cè)方法。通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化, 確定了色譜條件。測(cè)定結(jié)果表明, 該方法的靈敏度和度可以滿(mǎn)足實(shí)際樣品檢測(cè)需要, 適用于蘿卜紅色素中花色苷含量的測(cè)定。