超低溫保存技術(shù)廣泛應(yīng)用于園林花卉種子保存的可能性,對18個科47種花卉種子進行了液氮超低溫保存研究,除了兩種花卉種子進入液氮后炸裂外,其余45種花卉種子保存后都有一定發(fā)芽率,有些花卉種子保存后種子發(fā)芽率還高于保存前。
結(jié)果表明:?液氮超低溫保存技術(shù)可以廣泛應(yīng)用于園林花卉的種子保存。?花卉種子在自然含水量狀態(tài)即可存于液氮中。? 從液氮罐中取出后,采用35~40°C溫水浴化凍有較高的發(fā)芽率。? 液氮超低溫保存對一些花卉種子萌發(fā)表現(xiàn)出促進作用。
種質(zhì)資源設(shè)施保存,是在人工控制環(huán)境下排除環(huán)境壓力和破壞,有效保存種質(zhì)材料的zui安全的保存方式,它包括種子低溫保存、超低溫保存、種質(zhì)離體培養(yǎng)保存等技術(shù)方法。
一般來說,它包括以下6個步驟:
(1)前培養(yǎng):對培養(yǎng)體短期的生長鍛煉處理,使其提高耐液氮保存的能力。
(2)防凍:培養(yǎng)體放入防凍液中,使其細胞降低冰點,減少因形成冰晶可能造成的損傷。
(3)變溫冷凍:按照不同變溫模式降溫冷凍,降溫速度依不同種質(zhì)材料采用特定的速度。
(4)超低溫保存:將冷凍材料保存到有效低溫環(huán)境中,以防止冰的游移或解體。
(5)解凍:一般認為快速解凍更好。從液氮環(huán)境中取出封裝好的材料,與其容器一同放入+40℃的無菌水浴中,直到解凍后才回到室溫下,未封裝的材料放到20~30℃的液體培養(yǎng)基中解凍。
(6)生命力測定:如用TTC染色法等。
種質(zhì)材料的超低溫保存,傳統(tǒng)的技術(shù)有干凍法、預(yù)凍法和兩步法,上世紀80年代末和90個代初玻璃化法和包埋脫水法開始應(yīng)用于植物材料的超低溫保存。
預(yù)凍法:將種質(zhì)材料在添加保護劑(如蔗糖、二甲亞砜、甘油等)后置于低溫冰箱或液氮蒸汽箱(-10~-70℃)中冰凍若干小時后投入液氮貯存。
兩步法:種質(zhì)材料在添加保護劑后,用程序降溫儀以某個速率(每分鐘0.1~0.5℃)降溫至轉(zhuǎn)移溫度(-40~-70℃),然后投入液氮中貯存,兩步法較預(yù)凍法更為嚴格。
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