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ELISA試劑盒為保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)精彩呈現(xiàn)首要選定ELISA類型,ELISA技能可用于測(cè)定抗原,也可用于測(cè)定抗體。ELISA試劑盒方法中有三個(gè)必要的試劑:
(1) 固相的抗原或抗體,即"免疫吸附劑"(immunosorbent)
(2) 酶符號(hào)的抗原或抗體,稱為"結(jié)合物"(conjugate)
(3) 酶反應(yīng)的底物
ELISA試劑盒分為以下幾種類型,實(shí)驗(yàn)君首要需求根據(jù)自己的待檢物來(lái)判定試劑盒類型:
1. 雙抗體夾心法:針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體別離作為固相捕獲抗體和酶標(biāo)檢測(cè)抗體。適用于測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原如血漿中的細(xì)胞因子,不適用于測(cè)定半抗原及小分子單價(jià)抗原。同理,也有雙抗原夾心法測(cè)抗體。
2.直接法:將抗原直接固定在固相載體上,參與酶符號(hào)的一抗,即可測(cè)定抗原總量。此法操作手續(xù)簡(jiǎn)略,因無(wú)須運(yùn)用二抗可防止交互反應(yīng)。
3.間接法:間接法是檢測(cè)抗體常用的方法,其原理為利用酶符號(hào)的抗抗體(抗*抗體)來(lái)檢測(cè)與固相抗原結(jié)合的待檢抗體。
4.競(jìng)爭(zhēng)法:小分子抗原或半抗原因缺少可作夾心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn),因而不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定,可以選用競(jìng)爭(zhēng)法模式。當(dāng)抗原材猜中的煩擾物質(zhì)不易除去,或不易得到滿意的純化抗原時(shí),可用此法檢測(cè)特異性抗體。
根據(jù)樣品中檢測(cè)物水平來(lái)選擇ELISA試劑盒:
如果實(shí)驗(yàn)君關(guān)于樣品中待檢物的水平?jīng)]有任何可參看的數(shù)據(jù),hao選擇寬動(dòng)力學(xué)檢測(cè)規(guī)劃的試劑盒。如果樣品中待檢物的含量很低,建議選擇高靈敏度的試劑盒。為了下降基質(zhì)效應(yīng),有必要用稀釋液至少做2倍稀釋。如果樣品中待檢物含量遠(yuǎn)超過試劑盒的檢測(cè)規(guī)劃(標(biāo)曲規(guī)劃), 也需做恰當(dāng)?shù)谋稊?shù)稀釋。在終計(jì)算結(jié)果時(shí),需乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
根據(jù)樣本可獲得性來(lái)選擇ELISA試劑盒:一般來(lái)說,商業(yè)化試劑盒的樣品用量都在50ul或100ul, 但也有一些供貨商的試劑盒對(duì)樣品的用量要求可少至10ul。如果您的樣品很名貴或較難獲取,則需求仔細(xì)考慮試劑盒對(duì)樣品用量的要求。如果樣品量少,且要做多因子檢測(cè)時(shí)更需穩(wěn)重。
ELISA試劑盒細(xì)致比較試劑盒要害性技能參數(shù):
ELISA試劑盒的要害技能參數(shù)包括板內(nèi)差異性、板間差異性、批間差異性、重復(fù)性、特異性及交叉反應(yīng)性、回收率等。如果實(shí)驗(yàn)君常常打開ELISA實(shí)驗(yàn),建議運(yùn)用同一廠家的試劑盒,這樣可盡量保證數(shù)據(jù)的重復(fù)性(當(dāng)然條件是實(shí)驗(yàn)條件的一致性)。關(guān)于科研用的定量ELISA試劑盒,不同的生產(chǎn)廠家運(yùn)用的抗體對(duì)、酶以及底物、生產(chǎn)工藝和研發(fā)實(shí)力不盡相同,天然不同廠家試劑盒測(cè)出的數(shù)據(jù)會(huì)有差異。
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