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上海古朵生物科技有限公司
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基因組DNA提取原理及常見問題分析

時間:2019/5/20閱讀:551
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    基因組,Genome,一般的定義是單倍體細(xì)胞中的全套染色體為一個基因組,或是單倍體細(xì)胞中的全部基因?yàn)橐粋€基因組?,F(xiàn)代遺傳學(xué)家認(rèn)為,基因是DNA(脫氧核糖核酸)分子上具有遺傳效應(yīng)的特定核苷酸序列的總稱,是具有遺傳效應(yīng)的DNA分子片段?;蛭挥谌旧w上,并在染色體上呈線性排列。基因不僅可以通過復(fù)制把遺傳信息傳遞給下一代,還可以使遺傳信息得到表達(dá)。不同人種之間頭發(fā)、膚色、眼睛、鼻子等不同,是基因差異所致。

    利用基因,人們可以改良果蔬品種,提高農(nóng)作物的品質(zhì),更多的轉(zhuǎn)基因植物和動物、食品將問世,人類可能在新世紀(jì)里培育出超級物作。通過控制人體的生化特性,人類將能夠恢復(fù)或修復(fù)人體細(xì)胞和器官的功能,甚至改變?nèi)祟惖倪M(jìn)化過程。

      本公司根據(jù)不同樣品來源(如:細(xì)菌、酵母、血液、動物組織、動物細(xì)胞、植物組織、植物細(xì)胞等),制作了多種提取得率高,純度好,簡單方便的試劑盒。

產(chǎn)品特點(diǎn)

整個實(shí)驗(yàn)流程不需要昂貴儀器,不需使用酚氯仿等有毒試劑,能夠得到高純度的大片段基因組DNA,操作簡單,可同時處理多個樣品。

提取得到的基因組DNA可用于各種方向的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),如:文庫構(gòu)建、基因圖譜、Sunthern-Blotting、PCR等。

使用樣品

細(xì)菌、酵母、血液、動物組織、動物細(xì)胞、植物組織、植物細(xì)胞等,hao使用新鮮樣品,或取樣后迅速將樣品密封,放于-20℃或-70℃保存,注意避免多次凍融樣品,否則將會導(dǎo)致所得基因組DNA的片段變小且提取質(zhì)量下降。

基因組DNA提取過程中注意事項:

1、因?yàn)镈NA的一級結(jié)構(gòu)是分子生物研究的基礎(chǔ),所以應(yīng)盡量保證DNA的完整性。

2、盡量去除多余雜質(zhì),如:蛋白、脂類、多糖、有機(jī)溶劑等的污染,以確保下游實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。

樣品的預(yù)處理方式

植物材料:液氮研磨

動物材料:勻漿、液氮研磨

細(xì)菌:*破壁

酵母:破壁酶,玻璃珠研磨

基因組提取常見問題

◆ 洗滌后硅膠膜上仍有雜質(zhì)殘留:

   細(xì)胞裂解不充分, 裂解液和樣品要快速充分混勻。

◆ 柱子堵塞:

   1.裂解或勻漿處理不*。減少樣品使用量,增加裂解液用量,增加勻漿和裂解時間。

   2.處理樣品太多。                            

◆ 洗脫產(chǎn)物DNA量很少或沒有:

   1.樣品中細(xì)胞或病毒濃度低。

   2.裂解液和樣品混合不均勻造成的細(xì)胞裂解不充分。

   3.蛋白酶K活性下降造成的細(xì)胞裂解不充分。    

   4.溫浴時間不夠造成的細(xì)胞裂解不充分或蛋白降解不*,盡量把組織切成小塊,延長溫浴時間,使裂解物中沒有顆粒狀物質(zhì)殘留。

   5.在上柱前,裂解物中沒加乙醇,或用低濃度乙醇代替無水乙醇。

   6.DNA沒有有效洗脫。提高洗脫效率,可將離心吸附柱加入洗脫液后在室溫靜置至少1 min,再離心。

   7.洗脫液pH不合適,低pH值會減少DNA產(chǎn)率。確保洗脫液pH值在7.0-8.5之間。

   8.洗脫體積太大,超過200μl洗脫體積所得的DNA濃度會降低,但DNA總量不會減少。

◆ A260/A280 比值較低:

   用水作為洗脫液時,比值偏低。

◆ A260/A280 比值較高:

   大量RNA殘留,沒有使用RNase A,或RNase A活性下降。

◆ DNA影響后續(xù)酶反應(yīng)實(shí)驗(yàn):

   1.在洗脫液中有殘留的漂洗液W1,可通過再次離心去除硅膠膜上的W1。

   2.大量RNA殘留。

◆ 緩沖液A、B中有白色沉淀:

   白色沉淀可能由于低溫或長時間放置產(chǎn)生,可在使用前在56℃重新加熱溶解。

◆ 操作中加入緩沖液B有白色沉淀:

   緩沖液B加入后產(chǎn)生的白色沉淀在70℃溫浴時會消失,不會影響下游操作。

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