近日，實(shí)驗(yàn)室的細(xì)胞培養(yǎng)人員抱怨培養(yǎng)瓶中在顯微鏡的觀察下有若干“小蠕蟲”爬動(dòng)，古朵生物提示您，這是黑膠蟲，可以說，這樣的細(xì)胞培養(yǎng)瓶可以說廢棄了，連二次實(shí)驗(yàn)的價(jià)值都沒，話說黑膠蟲難道是實(shí)驗(yàn)室的操作不當(dāng)，如添加細(xì)胞因子，小分子化合物等中出現(xiàn)了人為的環(huán)境污染？不是的，黑膠蟲產(chǎn)生的致命原因是假的胎牛血清導(dǎo)致！
 

　　據(jù)病毒所和軍科院鑒定是一種寄生于牛血清內(nèi)的一種原蟲，似乎和草履蟲和變形蟲有類似之處，然而由于課題經(jīng)費(fèi)不夠而不能繼續(xù)進(jìn)行下去。
 

　　在細(xì)胞培養(yǎng)的時(shí)候，有時(shí)會(huì)在400倍顯微鏡下看到小黑點(diǎn)在動(dòng)，小黑點(diǎn)有時(shí)呈點(diǎn)狀，有時(shí)呈小的片狀，運(yùn)動(dòng)形式為在原地振動(dòng)(類似布朗運(yùn)動(dòng))，這種小黑點(diǎn)既不是細(xì)菌、霉菌，也不是支原體(我們曾經(jīng)請周守長用血平板培養(yǎng)過，沒有菌落出現(xiàn))，目前業(yè)內(nèi)人士稱其為“黑膠蟲”。
 

　　國內(nèi)的血清中，通常滅活之后都會(huì)有絮狀沉淀出現(xiàn)，而黑膠蟲出現(xiàn)時(shí)，所使用的血清被反復(fù)凍融過多次。所以推測，所謂的“黑膠蟲”其實(shí)就是血清中的某些蛋白成分的物質(zhì)，經(jīng)過滅活之后喪失活性，在培養(yǎng)基中，鏡檢見到的運(yùn)動(dòng)其實(shí)是這些物質(zhì)在溶液中做“布朗運(yùn)動(dòng)”。隨著細(xì)胞消耗培養(yǎng)基，這些物質(zhì)越來越多，zui后細(xì)胞所用的營養(yǎng)消耗完，細(xì)胞容易死亡。
 

　　市場上的胎牛血清種類繁多，魚龍混雜，很多科研工作者，特別是剛接觸細(xì)胞培養(yǎng)的人，難以分辨血清質(zhì)量的優(yōu)劣，假的胎牛血清，導(dǎo)致黑膠蟲的現(xiàn)象越明顯，總結(jié)如下：
 

　　一、外觀
 

　　拿到血清，zui先接觸的是血清外觀，對于缺少細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)的人來說，外觀的判斷尤為重要
 

　　1、顏色
 

　　根據(jù)血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色，我國的細(xì)胞培養(yǎng)用血清標(biāo)準(zhǔn)是不高于20mg/dl，實(shí)際上，血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響，這個(gè)指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度，良好的操作能降低血清的溶血。
 

　　國產(chǎn)血清的采血點(diǎn)很分散，大多是由屠戶采血后馬上離心收集，所以很少會(huì)有溶血，表現(xiàn)出明亮的蠟黃色，當(dāng)然，國產(chǎn)血清也很少有標(biāo)準(zhǔn)意義上的胎牛血清。
 

　　進(jìn)口胎牛血清或多或少總有點(diǎn)溶血，因?yàn)檎嬲奶ヅＱ迥δ懿?，紅細(xì)胞容易破裂。
 

　　總的來說，國產(chǎn)的血清呈現(xiàn)出蠟黃。進(jìn)口的血清，質(zhì)量好的呈現(xiàn)出談黃、微紅色，如Gibco 16000，差點(diǎn)的呈現(xiàn)出橘紅色或鮮紅色。當(dāng)然，熱滅活血清或保存不當(dāng)?shù)难?，由于血紅蛋白的破壞氧化，會(huì)呈現(xiàn)出暗紅，甚至咖啡色。
 

　　2、沉淀
 

　　很多血清客戶，會(huì)發(fā)現(xiàn)進(jìn)口血清有沉淀，從而懷疑血清的質(zhì)量問題，這是沒有根據(jù)的。
 

　　血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產(chǎn)生，對血清質(zhì)量沒有任何影響，沉淀的產(chǎn)生原因很多，和廠家的加工生產(chǎn)方式密切相關(guān)。
 

　　國產(chǎn)的血清，大多來自北方，由于價(jià)格低廉，保存環(huán)境都不好，從采血、冷凍、運(yùn)輸?shù)缴a(chǎn)會(huì)經(jīng)過多次凍融，每次凍融過程，就會(huì)析出部分纖維蛋白沉淀，這樣，血清成品過濾后看起來反而更加的“干凈”，很少有沉淀產(chǎn)生。
 

　　進(jìn)口的胎牛血清，過濾分裝前很少會(huì)反復(fù)凍融，生產(chǎn)后的成品也是清澈的，但隨著時(shí)間的推移，血清中的大量纖維蛋白會(huì)析出形成沉淀。當(dāng)然，進(jìn)口的新生牛血清，一般牛齡都在2周左右，血清中的各種蛋白含量明顯偏高，生產(chǎn)后血清可能會(huì)渾濁，甚至有大量沉淀。
 

　　當(dāng)然，購買回來的血清都是冰凍狀態(tài)，使用時(shí)需要融化，融化過程在溫度較低的狀態(tài)下慢慢進(jìn)行，否則沉淀相對較多，雖然沉淀并不直接影響血清的質(zhì)量，但對細(xì)胞的顯微觀察有一定的阻礙。
 

　　3、澄清度
 

　　進(jìn)口胎牛血清由于蛋白和脂類等物質(zhì)含量低，表現(xiàn)為稀薄、清淡，而國產(chǎn)血清，因?yàn)榻^大多數(shù)是新生牛血清，相對而言更加粘稠，顏色略深，這對于初步接觸血清的人很難判斷，但把兩者進(jìn)行對比，可容易分辨。
 

　　二、主要技術(shù)指標(biāo)
 

　　目前國內(nèi)血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是2005版的《中華人民共和國藥典》，主要指標(biāo)有以下幾點(diǎn)：
 

　　1、內(nèi)毒素
 

　　標(biāo)準(zhǔn)為不高于5EU/ml。內(nèi)毒素是細(xì)菌破碎后細(xì)胞壁的成分，因此內(nèi)毒素含量的高低可表現(xiàn)出采血到生產(chǎn)一系列過程中的無菌操作情況。目前，國產(chǎn)血清基本都能達(dá)到這一要求，很多進(jìn)口胎牛血清內(nèi)毒素含量反而更高，如Gibco 26140，只要求不高于50EU/ml，高出我國標(biāo)準(zhǔn)10倍，即使是16000，也要10EU/ml，血清質(zhì)量也未見影響?？梢姡瑑?nèi)毒素含量偏高不影響質(zhì)量，除非含量*，預(yù)示著已經(jīng)污染。
 

　　2、總蛋白含量
 

　　胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml，數(shù)值偏高，說明采血的牛齡偏大，不是胎牛，數(shù)值偏低，表明血清可能摻水了。
 

　　3、血紅蛋白
 

　　標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl，顏色越紅，數(shù)值越高，反之，數(shù)值越低。
 

　　4、pH
 

　　國產(chǎn)血清，大多高于7.5，進(jìn)口胎牛血清，大多低于7.5，具體原因未知，可能和牛齡有關(guān)，這也能用來初步鑒別血清的來源。
 

　　5、微生物
 

　　包括細(xì)菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原性病毒等。隨著國內(nèi)血清廠家生產(chǎn)條件的改善提高，細(xì)菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制，支原體經(jīng)過0.1um過濾，大多也能清除。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴(yán)重的，主要是生產(chǎn)環(huán)境過程中帶入，又無法過濾，很難*清除，但對血清質(zhì)量影響不大。病原性病毒，特別是BVDV，在國產(chǎn)血清中幾乎90%以上都存在，這類微生物是影響國產(chǎn)血清質(zhì)量的重要因素之一，而進(jìn)口胎牛血清中基本都控制的很好。
 

　　6、免疫球蛋白
 

　　國產(chǎn)血清的只是定性檢測，結(jié)果也很不準(zhǔn)確，進(jìn)口胎牛血清大多定量檢測。免疫球蛋白的數(shù)值能*體現(xiàn)出采血的時(shí)的牛齡情況，國產(chǎn)血清，基本都是新生牛的，血清中容易產(chǎn)生IgM，IgG的含量也偏高，進(jìn)口胎牛血清，不含IgM，IgG的含量也較低。
 

　　7、其它
 

　　不管是國產(chǎn)還是進(jìn)口血清，都是不測抗生素的(無四環(huán)素胎牛血清除外)。國外，抗生素的使用很嚴(yán)格，用量也很少，每頭奶牛的產(chǎn)品包括血清都可以溯源的，因此可以做到胎牛血清中不含抗生素或含量極低；國內(nèi)，抗生素的濫用已成了普遍現(xiàn)象，血清中殘留很高，對細(xì)胞培養(yǎng)極為不利，這是國產(chǎn)血清質(zhì)量差的根本原因。
 

　　三、血源
 

　　市場上的血清血源主要分為中國、北美、南美和澳洲。
 

　　1、國產(chǎn)血清質(zhì)量差，這是*的，主要原因并不是生產(chǎn)廠家的責(zé)任，而是天然環(huán)境差和抗生素的大量使用。國內(nèi)環(huán)境污染嚴(yán)重，同時(shí)飼養(yǎng)過程中抗生素極其濫用，有毒有害物質(zhì)會(huì)大量殘留在血清中，zui終不利于細(xì)胞的生長。
 

　　2、南美血清，來源很多，如Bioind的以色列巴拿馬(04-001-1A/B，04-121-1A/B，04-001AUS-1A/B，04-002-1A/B，04-222-1A/B，04-011-1A/B，04-201-1A/B，04-400-1A/B) 、Gibco的烏拉圭、巴西等，這些血清由于采血的不可控性，質(zhì)量參差不齊，當(dāng)然，相對于國內(nèi)血清來說好的多。另外，國內(nèi)銷售的南美血清大多顏色鮮紅，如Bioind、Gibco、Hylone等品牌，但阿根廷的血清例外，這可能和各國的采血、生產(chǎn)工藝有關(guān)。
 

　　3、北美血清，主要來自美國和加拿大，如Hclone的SH30396、SH30070、SH30071、Gibco的16000-044、26140-079等。這類血清，等級越高的顏色越淡，表現(xiàn)為淡黃中帶一點(diǎn)微紅，SH30070和SH30396對比就很明顯，特級胎牛血清基本就能進(jìn)行干細(xì)胞培養(yǎng)。北美血清還有一個(gè)顯著特點(diǎn)就是每瓶血清都能溯源，這對一些大型的疫苗廠、藥廠尤為重要。
 

　　4、澳洲血清，來源主要是新西蘭和澳大利亞，這是在北美血清禁運(yùn)之后進(jìn)入中國市場的，一般不具有溯源功能，由于生產(chǎn)、運(yùn)輸?shù)仍?，價(jià)格相對來說比較貴。拿Gibco的10099和16000相比較，后者質(zhì)量等級更高，顏色更淡，性價(jià)比更高。
 

　　一、特級類胎牛血清(于干細(xì)胞的胎牛血清)
 

　　1、Hyclone 北美特級胎牛血清（SH30070.03）
 

　　目前，性能好的血清，實(shí)驗(yàn)室反饋不錯(cuò)的，那就是Hyclone SH30070.03的特級胎牛血清， Hyclone的“頭牌”。
 

　　這款血清--Hyclone特級胎牛血清(Defined FBS)，貨號：SH30070，是世界上*經(jīng)過40納米過濾的*胎牛血清，的促細(xì)胞生長作用及產(chǎn)品穩(wěn)定性。內(nèi)毒素含量小于10EU/ml，血紅蛋白含量小于10mg/dl。此血清可以廣泛用于各種細(xì)胞培養(yǎng)，包含任何干細(xì)胞系的培養(yǎng)。
 

　　2、Gibco北美特級胎牛血清（16000-044）
 

　　invitrogen公司在美國原裝生產(chǎn)的特級胎牛血清，貨號：16000-044，是100nm過濾3次，內(nèi)毒素和血紅蛋白含量都可以與Hyclone的SH30070.03相媲美。也可以用于培養(yǎng)大部分的干細(xì)胞系。
 

　　二、優(yōu)等類胎牛血清
 

　　1、Hyclone加拿大優(yōu)等胎牛血清（SH30396）
 

　　性價(jià)比高的是Hyclone加拿大優(yōu)等胎牛血清(Characterizend FBS)，貨號：SH30396，血清采自加拿大，由Hyclone公司總部的員工采集加工，采集方法，加工過程，檢定標(biāo)準(zhǔn)與美國原產(chǎn)優(yōu)等胎牛血清*一致，市場*美國原產(chǎn)的。經(jīng)過3次100nm過濾，內(nèi)毒素含量小于25EU/ml，血紅蛋白含量小于25mg/dl。此血清，在2005年以前，是很多實(shí)驗(yàn)室選擇血清的，價(jià)格適中，質(zhì)量過硬，應(yīng)用細(xì)胞非常廣泛。
 

　　2、Hyclone澳大利亞優(yōu)等胎牛血清（SH30084）
 

　　基本與加拿大的優(yōu)等血清是一樣的，級別也非常相似，各種級別都有。
 

　　3、Gibco澳大利亞胎牛血清（10099-141）與Hyclone澳大利亞胎牛血清差不多，市場價(jià)也是3200元/500ml左右。這一級別的血清，也能用于干細(xì)胞培養(yǎng)，可是，不象特級胎牛血清那么。
 

　　三、普通進(jìn)口胎牛血清 Hyclone南美胎牛血清（SV30087）
 

　　目前市場上用的多的Hyclone血清是南美胎牛血清(FBS) SV30087 ，此血清采自南美，在國內(nèi)(蘭州)過濾并測試檢驗(yàn)，經(jīng)三次100納米過濾，根據(jù)中國商標(biāo)法的規(guī)定標(biāo)貼中文標(biāo)簽，內(nèi)毒素含量小于等于10EU/ml,血紅蛋白含量小于等于20mg/d。此血清廣泛用于各種腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，還沒有資料記載能夠用于干細(xì)胞，也聽說有少數(shù)人用于干細(xì)胞培養(yǎng)的，不過，因?yàn)楸旧硌t素比較高，所以，不要用于干細(xì)胞，
 

　　四、國產(chǎn)的各種系列胎牛血清
 

　　國產(chǎn)的胎牛血清，國內(nèi)沒有嚴(yán)格意義的胎牛血清，胎牛血清本身是需要穿刺取血的，而國內(nèi)都是剖腹產(chǎn)出胎牛，8小時(shí)左右取血，然后，進(jìn)行過濾分裝。所以，國產(chǎn)的胎牛血清不是嚴(yán)格意義的胎牛血清。不過也很多實(shí)驗(yàn)室使用，具體情況那就看實(shí)驗(yàn)的要求了。
 

　　五、其他血清
 

　　新生牛血清，小牛血清，一般國產(chǎn)的，效果也還是不錯(cuò)的，不過，建議不要用于細(xì)胞培養(yǎng)，這些血清，大多是用于封閉液、保護(hù)液、緩沖液等等用途的。