瑞氏染液由酸性染料伊紅和堿性染料美藍組成的復合染料，溶于甲醇，后解離為帶正電的美藍和帶負電的伊紅離子。伊紅通常為鈉鹽，有色部分為陰離子。美藍通常為氯鹽，有色部分為陽離子。甲醇的作用：一是溶解美藍和伊紅，使其解離為有色美藍正離子的和伊紅負離子。后兩者可以選擇性地吸附于血細胞內(nèi)的不同成分而使其著色；二是固定細胞形態(tài)，加速染色反應(yīng)，增強染色效果。
 

　　瑞氏染液染色原理：
 

　　瑞氏染色法使細胞著色既有化學親和反應(yīng)，又有物理吸附作用。瑞氏染料由酸性染料伊紅和堿性染料美藍的氧化物(天青)組成,其深于甲醇后,解離為帶正電的美藍和帶負電的伊紅離子。各種細胞由于所含化學成分不同，對染料的親和力也不一樣，因此，染色后各種細胞呈現(xiàn)出各自的染色特點。
 

　　瑞氏染液配置方法：
 

　　瑞士染料830gm或1g；
 

　　甲醇(AR) 500ml或600ml；
 

　　先稱干燥(事先放入溫箱干燥過夜)瑞氏染料放置乳缽內(nèi)，用乳棒輕輕敲碎染料成粉末，再行研磨至聽不到研芝麻聲即呈細粉末，加少許甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸內(nèi)顯“一面鏡”光澤，而無染料粉粒沉著。再加較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮，靜置片刻，將上層液體倒入一清潔儲存瓶內(nèi)(hao用甲醇空瓶)，再加甲醇研磨，重復數(shù)次，至乳缽內(nèi)染料及甲醇用完為止，搖勻，密封瓶口。存室溫暗處，儲存愈久，則染料溶解、分解就越好，一般儲存3個月以上為佳。
 

　　瑞氏染液使用說明：
 

　　1、取涂片、自然干燥。
 

　　2、滴加瑞氏染液染3分鐘,使標本被其中甲醇所固定。
 

　　3、加等量PH6.4的磷酸鹽緩沖液(或等量超純水)輕輕晃動玻片, 與瑞氏染色液混勻，靜置5分鐘。
 

　　4、水洗、吸干、鏡檢。
 

　　5、細菌染成藍色，組織細胞胞漿紅色，細胞核藍色。
 

　　注意事項：
 

　　1、PH對細胞染色有影響。由于細胞中各種蛋白均為兩性電解質(zhì)，所帶電荷隨溶液PH而定。對某一蛋白質(zhì)而言，如環(huán)境PH

　　2、未干透的血膜不能染色，否則染色時血膜易脫落。
 

　　3、染色時間與染液濃度、染色溫度成反比；而與細胞數(shù)量成正比。
 

　　4、沖洗時不能先倒掉染液，應(yīng)用流水沖去，以防染料沉淀在血膜上。
 

　　5、如血膜上有染料顆粒沉積，可加少許甲醇溶解，但需立即用水沖洗掉甲醇，以免脫色。
 

　　6、染色過淡，可以復染。復染時應(yīng)先加緩沖液，創(chuàng)造良好的染色環(huán)境，而后加染液，或加染液與緩沖液的混合液，不可先加染液。
 

　　7、染色過深可用水沖洗或浸泡水中一定時間，也可用甲醇脫色。
 

　　8、染色偏酸或偏堿時，均應(yīng)更換緩沖液再重染。