中文名：人核基質(zhì)蛋白22(NMP-22)ELISA試劑盒
 

　　規(guī)格：48t/96t
 

　　保存：2~8℃
 

　　有效期：6個(gè)月
 

　　檢測(cè)范圍：0.5U/ml - 20U/ml
 

　　使用目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中核基質(zhì)蛋白22(NMP-22)含量。
 

　　樣本：血清、血漿、細(xì)胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。
 

　　特點(diǎn)：敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好、試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡(jiǎn)便。
 

　　用途：用于測(cè)定血清，血漿及相關(guān)液體樣本中相關(guān)含量或活性。
 

　　種屬：人、大鼠、小鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚等。
 

　　運(yùn)輸方式：現(xiàn)貨供應(yīng)，一般為快遞運(yùn)輸，江浙滬隔天到，外地及偏遠(yuǎn)地方三至五天時(shí)間到貨。
 

　　檢測(cè)原理：采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。
 

　　實(shí)驗(yàn)原理
 

　　本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人核基質(zhì)蛋白22(NMP-22)水平。用純化的人核基質(zhì)蛋白22(NMP-22)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入核基質(zhì)蛋白22(NMP-22)，再與HRP 標(biāo)記的核基質(zhì)蛋白22(NMP-22)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的核基質(zhì)蛋白22(NMP-22)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人核基質(zhì)蛋白22(NMP-22)濃度。
 

　　試劑盒組成
 

　　1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
 

　　2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品(32U/ml) 0.5ml×1 瓶
 

　　3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶
 

　　4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說(shuō)明書 1 份
 

　　5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
 

　　6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè)
 

　　標(biāo)本要求
 

　　1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
 

　　2.不能檢測(cè)含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
 

　　操作步驟
 

　　1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
 

　　16U/ml 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 

　　8U/ml 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 

　　4U/ml 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 

　　2U/ml 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 

　　1U/ml 1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 

　　2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
 

　　3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
 

　　4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
 

　　5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復(fù)5 次，拍干。
 

　　6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
 

　　7. 溫育：操作同3。
 

　　8. 洗滌：操作同5。
 

　　9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 分鐘.
 

　　10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
 

　　11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
 

　　計(jì)算
 

　　以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。
 

　　注意事項(xiàng)
 

　　1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
 

　　2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
 

　　3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，*使用排槍加樣。
 

　　4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD 值)，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
 

　　5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
 

　　6.底物請(qǐng)避光保存。
 

　　7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
 

　　8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
 

　　9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
 

　　保存條件及有效期
 

　　1.試劑盒保存：；2-8℃。
 

　　2.有效期：6 個(gè)月