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小鼠抗單核細(xì)胞抗體ELISA試劑盒操作步驟

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中文全稱:小鼠抗單核細(xì)胞抗體(AMA)ELISA試劑盒
英文名稱:Mouse anti-Monocyte antibody,AMA ELISA kit
供應(yīng)商:上海古朵生物
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
產(chǎn)地:國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
樣本:血清,血漿,細(xì)胞培養(yǎng)上清液,尿液,組織勻漿及相關(guān)液體樣等
標(biāo)記物:人,大鼠,小鼠,豚鼠,豬,牛,羊等種屬
應(yīng)用:科研實(shí)驗(yàn)
檢測(cè)方法:雙抗體夾心法,間接法,競(jìng)爭(zhēng)法等
檢測(cè)限:人,大鼠,小鼠,豚鼠,豬,牛,羊等種屬


小鼠抗單核細(xì)胞抗體(AMA)ELISA檢測(cè)試劑盒應(yīng)用范圍可概括四個(gè)方面:
1、免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位。
2、研究抗酶抗體的合成。
3、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。
4、定量檢測(cè)體液中抗原或抗體成份。

 

樣本處理方法
植物樣本:
1,樣本在保持鮮重的同時(shí),重量不能低于50mg
2,組織勻漿比例按照10%進(jìn)行,相當(dāng)于1g組織加9ml的勻漿液,勻漿液要求用PBS,濃度是0.01mol/L,PH控制在7.2-7.4我們并不要求沒(méi)個(gè)樣本的重量必須保持1g整數(shù),只要大于50mg即可,相對(duì)應(yīng)勻漿液按照1:9的關(guān)系隨之改變即可
3,剪碎葉片組織放入碾缽,然后液氮碾磨成粉末,加入換算后的勻漿液的量
4,離心取上清
備注:換算結(jié)果是乘以加入勻漿液的量,除以稱取的重量,這個(gè)終換算比例相當(dāng)于乘以9g除以1ml,如果檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)部,需要加一個(gè)超聲破碎過(guò)程!
組織勻漿三原則
剪碎葉片組織放入碾缽,然后液氮碾磨成粉末,加入換算后的均漿液的量。這個(gè)不會(huì)處理的話,可以直接郵寄葉片我們處理。

小鼠抗單核細(xì)胞抗體(AMA)elisa檢測(cè)試劑盒樣本需求量:
植物是組織樣本,固體 要求的重量是大于50mg。血清血漿50微升以上,一個(gè)樣本。對(duì)大鼠小鼠液體樣本需求可以適當(dāng)放寬,但必須大于10微升以上

組織勻漿原則:
1,對(duì)于樣本要求保持鮮重
2,稱取樣本中的重量不小于50mg,一般以1g為基準(zhǔn),但不嚴(yán)格要求固定樣本每個(gè)重量必須達(dá)到相同的水平。
3,勻漿的比例選取10%,相當(dāng)于1g組織加9ml的勻漿液來(lái)進(jìn)行勻漿。
4,勻漿液選取PBS(PH=7.2-7.4,濃度為0.01mol/L)
5,勻漿過(guò)程選用組織勻漿器,冰浴上勻漿。(或者進(jìn)行液氮碾磨)
6,離心取上清,離心轉(zhuǎn)速選用5000轉(zhuǎn)每分,時(shí)間是15分鐘。取上清液待檢!
血清血漿的收集
首先要求確定樣本收集類型,血清還是血漿?一般情況收集血清為好,血清收集2種方法,如下:

1.促凝管(臨床上用橘紅色管頭)待分層后取上清液保存

2.自然凝固,取普通生化試管,自然凝固30分鐘以上,然后離心取上清,離心轉(zhuǎn)速為2000轉(zhuǎn)每分,時(shí)間15分鐘。

全血收集完成后進(jìn)了分離出血紅細(xì)胞,避免導(dǎo)致溶血對(duì)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生干擾
其次涉及樣本保存,因?yàn)椴淮_定老師樣本取樣周期和實(shí)驗(yàn)周期到底有多長(zhǎng),這個(gè)過(guò)程涉及以下問(wèn)題。

1.關(guān)于樣本檢測(cè)問(wèn)題,如果樣本取樣周期過(guò)程,涉及到分不同時(shí)間段來(lái)檢測(cè),那么試劑盒的批次也會(huì)出現(xiàn)差異,會(huì)有一定的變異系數(shù)。這個(gè)過(guò)程有2個(gè)建議,第1,可以收集一定數(shù)量(滿足一個(gè)試劑盒的量或者幾個(gè)試劑盒的量)來(lái)進(jìn)行一次實(shí)驗(yàn)。避免樣本長(zhǎng)時(shí)間保存(樣本保存時(shí)間越長(zhǎng),蛋白降解風(fēng)險(xiǎn)越大),但缺點(diǎn)是會(huì)用到不同批次試劑盒,影響批間差。第二個(gè)就是把樣本全部收集好了后,再一次進(jìn)行實(shí)驗(yàn),用同一批次試劑盒。這個(gè)可以減少批間差,但樣本不同時(shí)間取樣會(huì)導(dǎo)致前后樣本數(shù)值之間會(huì)存在一定的差異性。這個(gè)還是要根據(jù)實(shí)際取樣周期和取樣量來(lái)做決定。

2.如果取樣周期比較久,而且每次樣本不是很多,每天或者短時(shí)間都有樣本出來(lái),這個(gè)情況樣本涉及到保存。保存條件是1周內(nèi)實(shí)驗(yàn)的,2-8℃,一周以上一個(gè)月以內(nèi)實(shí)驗(yàn),-20℃保存,一月以上-80℃保存。

血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
批號(hào):現(xiàn)制備
有效期:6個(gè)月

 

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