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ELISA試劑盒固相載體采用免疫酶技術(shù)嗎?

時(shí)間:2018-8-2閱讀:302
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       免 疫酶技術(shù)的主要試劑為固相的抗原或抗體、酶標(biāo)記的抗原或抗體和與標(biāo)記酶直接關(guān)聯(lián)的酶反應(yīng)底物。可作固相載體的物質(zhì)很多,常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有 較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能,抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后保留原來(lái)的免疫活性。聚苯乙烯為塑料,可制成各種形式,在測(cè)定過(guò)程中,它作為載體和容器,不參與化學(xué) 反應(yīng),加之它的價(jià)格低廉,所以被普遍采用。


       聚苯乙烯載體的形狀主要有三種:小試管、小珠和微量反應(yīng)板。小試管的特點(diǎn)是還能兼作反應(yīng)的容器,后放 入分光光度計(jì)中比色。小珠一般為直徑0.6cm的圓球,表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積大增加。如用特殊的洗滌器,在洗滌過(guò)程中使圓珠滾動(dòng)淋洗,效果更好。常 用的載體為微量反應(yīng)板,于ELISA測(cè)定的產(chǎn)品也稱為ELISA板,通用的標(biāo)準(zhǔn)板形是8×12的96孔式。為便于作少量標(biāo)本的檢測(cè),有制成8聯(lián)或 l2聯(lián)孔條的,放入座架后,大小與標(biāo)準(zhǔn)ELISA板相同。ELISA板的特點(diǎn)是可以同時(shí)進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測(cè),并可在特定的比色計(jì)上迅速讀出結(jié)果。現(xiàn)在已有 多種自動(dòng)化儀器用于微量反應(yīng)板型的ELISA檢測(cè),包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟,對(duì)操作的標(biāo)準(zhǔn)化極為有利。
       良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性 能好,空白值低,孔底透明度高,各板之間和同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于配料的不同和制作工藝的差別,各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大。因此 每一批號(hào)的聚苯乙烯制品在使用前須檢查其性能。常用的檢查方法為:以一定濃度的人IgG(一般為10ng/ml)包被ELISA板各孔后,每孔內(nèi)加入適當(dāng) 稀釋的酶標(biāo)抗人IgG抗體,保溫后洗滌,加底物顯色,終止酶反應(yīng)后分別測(cè)每孔溶液的吸光度??刂品磻?yīng)條件,使各讀數(shù)在0.8左右。計(jì)算所有讀數(shù)的平均值。 所有單個(gè)讀數(shù)與平均讀數(shù)之差應(yīng)小于10%.與聚苯乙烯類似的塑料為聚氯乙烯。作為ELISA固相載體,聚氯乙烯板的特點(diǎn)為質(zhì)軟板薄,可切割,價(jià)廉、但光潔 度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高,但空白值有時(shí)也略高。
       為比較不同固相在某一ELISA測(cè)定中的優(yōu)劣,可用以下方法加以檢驗(yàn):用其他免疫學(xué)測(cè)定方法選出一個(gè)典型的陽(yáng)性標(biāo)本和一個(gè)典型的陰性標(biāo)本。將它們分別進(jìn)行一系列稀釋后,ELISA試劑盒在不同的固相載體上按預(yù)定的ELISA操作步驟進(jìn)行測(cè)定,然后比較測(cè)定結(jié)果。在哪一種載體上陽(yáng)性結(jié)果與陰性結(jié)果判別大,這種載體就是這一ELISA測(cè)定的合適的固相載體。
       除 塑料制品外,固相酶免疫測(cè)定的載體還有兩種材料:一是微孔濾膜,如**纖維素膜、尼龍膜等,這類測(cè)定形式將在本章“膜載體的酶免疫測(cè)定"中介紹。另一種載 體是以含鐵的磁性微粒制作的,反應(yīng)時(shí)固相微粒懸浮在溶液中,具有液相反應(yīng)的速率,反應(yīng)結(jié)束后用磁鐵吸引作為分離的手段,洗滌也十分方便,但需配備特殊的儀 器。

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