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了解了*和雙抗,還怕養(yǎng)不出好細(xì)胞么

時(shí)間:2019-5-20閱讀:932
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      一說到培養(yǎng)細(xì)胞,*和雙抗絕dui是培養(yǎng)過程中*的一部分,對細(xì)胞培養(yǎng)是否成功與否有著關(guān)鍵性的作用。所以,了解*和雙抗,我們培養(yǎng)細(xì)胞的道路就已經(jīng)走成功了一步。
*
*是什么?
     *是一種解離試劑,本質(zhì)是可以降解蛋白的酶,生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用來把貼壁細(xì)胞從貼壁面解離下來和使細(xì)胞解聚,也可以用于原代細(xì)胞的傳代過程中分散組織。
*使用的濃度是多少?

*濃度:常用0.25%*+0.02?TA作為消化液。

為什么收到的*會有顏色差異?
商品化*溶液需要用干冰運(yùn)輸,在運(yùn)輸過程中,*溶液中的二氧化碳與干冰揮發(fā)的二氧化碳可能會極少部分的氣體交換,導(dǎo)致溶液PH的漂移。有些*溶液里含有酚紅作為PH值指示劑,因此*PH的變化是肉眼可觀察到的。由干冰運(yùn)輸過程中導(dǎo)致的PH值的變化很小,PH值會從7.2-8.0變化到了6.8左右,在PH值7.2-8.0的時(shí)候,溶液呈淡紅色;PH值6.8左右時(shí)呈淡黃色的。因此*顏色的變化是由PH值的變化引起,歸因于使用干冰運(yùn)輸。這種顏色的變化是行業(yè)普遍現(xiàn)象,在不同供應(yīng)商的*產(chǎn)品都會出現(xiàn)。
淡黃色的*溶液能放心使用嗎?
簡單一個(gè)字:能

對于*呈黃色的問題,不同品牌也都對此現(xiàn)象進(jìn)行了測試實(shí)驗(yàn)。變色的*同樣能很好的用于細(xì)胞的解離,請放心使用。
細(xì)胞消化時(shí),*不去除對細(xì)胞的影響
細(xì)胞消化時(shí),如果消化液中只有*,不含EDTA,不去除是沒有問題的。
如果消化液中含有*和EDTA,去除。EDTA是一種化學(xué)螯合劑,主要作用在于能螯合Ca、Mg離子,使細(xì)胞分離。但EDTA不能被血清中和,消化后要*清洗去除,否則細(xì)胞易脫壁。**和EDTA聯(lián)合使用可提高消化效率,所以常二者合用。

*的保存
*可在-20℃下保存一年。隨著時(shí)間延長,*的消化能力減弱。*可分裝凍存,在使用前從-20℃冰箱取出。盡量避免在4℃*保存。

雙抗
什么是雙抗?
雙抗就是青*混合液,青*混合液(100X) 。是專門用于細(xì)胞培養(yǎng)的,可以直接添加到細(xì)胞培養(yǎng)液內(nèi)。

雙抗作用是什么?
雙抗起的作用:抗生素,抑制細(xì)菌生長;避免細(xì)胞污染。

培養(yǎng)液中需要加入雙抗嗎?
加不加雙抗不是絕dui的,視實(shí)際情況而定。
如果你實(shí)驗(yàn)室條件足夠好,如果你操作足夠規(guī)范,就盡量不要加雙抗了。相反,如果你實(shí)驗(yàn)條件不夠,操作也沒有絕dui把握,還是加的好。的方法是做個(gè)實(shí)驗(yàn)對照,看有沒有必要加雙抗。

如何加入雙抗?
在細(xì)胞培養(yǎng)液中*的*的工作濃度為100U/ml,*的工作濃度為0.1mg/ml。
如果加多了話對細(xì)胞毒性太大,細(xì)胞生長艱難。加入雙抗時(shí),一般先加在培養(yǎng)基里,因?yàn)槿绻侵苯釉趽Q液傳代滴加的話,那個(gè)雙抗的濃度實(shí)在不好控制。
誤區(qū):*使用抗生素,以對抗污染

細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)不應(yīng)常規(guī)使用抗生素
連續(xù)使用抗生素會促進(jìn)抗生素耐藥性細(xì)胞株的產(chǎn)生,導(dǎo)致輕度污染持續(xù)存在,一旦將抗生素從培養(yǎng)基中去除,這種輕度污染zui終將發(fā)展成大規(guī)模污染
連續(xù)使用抗生素會掩蓋支原體感染及其他隱性污染
有些抗生素會與細(xì)胞發(fā)生交叉反應(yīng),干擾您研究的細(xì)胞過程

雙抗的保存
雙抗通常情況下在-20℃保存一年。由于該試劑在4℃下*存放是不穩(wěn)定的,應(yīng)分裝后在-20℃下避光保存。*在2-8的℃存放時(shí)間不應(yīng)超過4天,*相對穩(wěn)定一點(diǎn),在2-8℃可以存放30天左右。切記,雙抗從凍融后里面的基本成分已開始降解。

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