現(xiàn)在市場上的抗體洗脫液和網(wǎng)上的洗脫液配方都是非常多的,那么選擇什么樣的洗脫液是有意義的呢?或者說將洗脫液帶來的不穩(wěn)定性降到低,那這里我先給講講我的淺見吧。
洗膜有的是強酸性,有的不是強酸性的,那么那個才是只是洗脫抗體,不洗脫蛋白的呢?
有的同學(xué)擔(dān)心,在洗膜的同時,我的蛋白也被洗掉了,本來豐度就非常低的蛋白,被這么強酸性液體洗滌30分鐘之后,膜上的檢測數(shù)據(jù)還準(zhǔn)嗎?
以上的擔(dān)心是對的,所以我的建議就是如果這個蛋白不好測,那么請你在第1次就檢測這個蛋白,避免抗體洗脫液帶來的懷疑,如果兩個都是,那么hao建議你不要使用抗體洗脫液了,兩個都新做吧。這樣的hao了,但是如果樣品非常珍貴,沒有重復(fù),那么請你每次測完目的蛋白后都要檢測一次內(nèi)參,這樣做一個數(shù)據(jù)上的處理,基本就能解決問題了。
那么問題又來了,這篇文章講正確選擇,從上面的說的都是跟這個無關(guān)呀,從上看什么樣的都行呀,沒有區(qū)別呀!
呵呵噠……區(qū)別還有的,上面的實驗誤差就是我們的正確選擇,把實驗誤差降低就是正確選擇,如果對抗體洗脫液不做選擇,有可能你的實驗誤差是選擇人的幾倍或者幾十倍,誰讓免疫印跡實驗這么靈敏呢!所以在你需要用到stripping buffer的時候,建議你先敷兩次內(nèi)參抗體,看看前后的差距,如果數(shù)據(jù)統(tǒng)計,前后的差距在5%之內(nèi),那么這個stripping buffer可以用了,如果超過5%,那么建議還是不要用的好(非用不可這個除外)。
所以大家明白了嗎?stripping buffer 不僅僅是帶來方便,同樣也帶來了不確定性,所以如何正確的選擇抗體洗脫液就成了你們需要考慮的問題。