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飼料粗脂肪的測(cè)定方法（索氏提取器脂肪測(cè)定儀）

【教學(xué)目標(biāo)】

1.學(xué)會(huì)各種飼料樣本的粗脂肪的方法。

2.學(xué)會(huì)儀器的使用

【教學(xué)重點(diǎn)】樣本的測(cè)定方法。

【教學(xué)方法】操作指導(dǎo)

【課時(shí)分配】6學(xué)時(shí)

【原理】索氏脂肪提取器中用乙mi提取試樣，稱提取物的重量，除脂肪外還有有機(jī)酸，磷脂、脂溶性Vit，葉綠素等，因而測(cè)定結(jié)果稱粗脂肪或乙mi提取物。

【分析步驟】

1）仲裁法使用索氏脂肪提取器測(cè)定。

索氏提取器應(yīng)干燥無(wú)水。抽提瓶(內(nèi)有沸石數(shù)粒)在105℃±2℃烘箱中烘干60min，干燥器中冷卻30min，稱重。再烘干30min，同樣冷卻稱重，兩次重量之差小于0.0008g為恒重。

稱取試樣1～5g(準(zhǔn)確至0.0002g)，于濾紙筒中，或用濾紙包好，放入105℃±2℃烘箱中，烘干120min(或稱測(cè)水分后的干試樣，折算成風(fēng)干樣重)，濾紙筒應(yīng)高于提取器虹吸管的高度，濾紙包長(zhǎng)度應(yīng)以可全部浸泡于乙mi中為準(zhǔn)。將濾紙筒或包放入抽提管，在抽提瓶中加無(wú)水乙mi60～100mL，在60～75℃的水浴(用蒸餾水)上加熱，使乙mi回流，控制乙mi回流次數(shù)為每小時(shí)約10次，共回流約50次(含油高的試樣約70次)或檢查抽提管流出的乙mi揮發(fā)后不留下油跡為抽提終點(diǎn)。

取出試樣，仍用原提取器回收乙mi直至抽提瓶全部收完，取下抽提瓶，在水浴上蒸去殘余乙mi。擦凈瓶外壁。將抽提瓶放入105℃±2℃烘箱中烘干120min，干燥器中冷卻30min稱重，再烘干30min，同樣冷卻稱重，兩次重量之差小于O.OOlg為恒重。

2）結(jié)果計(jì)算

式中：m ——風(fēng)干試樣重量，g。

m₁ ——已恒重的抽提瓶重量，g。

m₂——己恒重的盛有脂肪的抽提瓶重量，g。

3）*法

⑴魯氏殘留法

①操作步驟

a.將脫脂濾紙裁成10×10cm²大小，疊成一邊不封口的紙包，用鉛筆編號(hào)，按順序排列于培養(yǎng)皿上，置于105℃土2℃烘箱中烘2h，取出放于干燥器中冷卻至室溫，分別放入同一稱量瓶中稱重(m₀，g)。

b.將2～5g風(fēng)干樣品(通過(guò)40目篩)用小藥匙小心裝入已經(jīng)稱重的紙包中，封上包口。

按順序排列于培養(yǎng)皿中。置于105℃±2℃烘箱中烘3h，取出放入干燥器中冷卻至室溫，分別放入原稱量瓶中，稱至恒重(m₁，g)。將樣品包放入抽提管中，倒入無(wú)水乙mi，使之剛超過(guò)樣品包高度，浸泡過(guò)夜。然后將浸泡過(guò)樣品的無(wú)水乙mi放入抽提瓶中，再重新向抽提管中倒入無(wú)水乙mi，使之*浸沒(méi)樣品包。連接裝置，接通冷凝水，在70～80℃水浴鍋中回流6～8h，回流速度以每分鐘20mL左右為宜。抽提完畢，取出樣品包，在通風(fēng)處揮干乙mi．剩余乙mi可進(jìn)行回收。

c.將樣品包仍按原序號(hào)排列在培養(yǎng)皿中，置于105℃±2℃烘箱中烘2h，取出放入干燥器中冷卻至室溫，再將樣品包放原稱量瓶中，稱至恒重(m₂，g)。

②結(jié)果計(jì)算

粗脂肪＝  m₁－m₂×*

          m₁－m₀

式中，m₀——濾紙＋稱量瓶重（g）；

m₁——提取前樣品包＋稱量瓶重（g）；

m₂——提取后樣品包＋稱量瓶重（g）。

上述兩種方法都是以乙mi為溶劑的提取方法，其優(yōu)點(diǎn)是具有較好的準(zhǔn)確度和精密度，尤其是測(cè)定粗脂肪含量在5%以下的樣品，用此法比較可靠。缺點(diǎn)是費(fèi)工費(fèi)時(shí)，反復(fù)提取需8～16h；另外乙mi不能將樣品中的全部脂肪提盡。這是因?yàn)椴糠种境Ｅc蛋白質(zhì)或碳水化合物等非脂肪成分結(jié)合。成為結(jié)合態(tài)脂類，如脂蛋白、糖脂、磷酯等，同時(shí)樣品也必須是烘干的，因乙mi難以滲入含水樣品的組織內(nèi)部。在烘干樣品時(shí)，又應(yīng)考慮到脂肪在高溫下易被空氣氧化等情況。

⑵脂肪測(cè)定儀

①操作步驟

a.打開(kāi)恒溫加熱裝置開(kāi)關(guān)，控制工作溫度為75℃。

b.用萬(wàn)分之一分析天平稱2g左右的樣品(準(zhǔn)確至0.0002g) (m₁)，放入濾紙筒內(nèi)烘干。

c.用套筒夾將6個(gè)濾紙?zhí)淄惭b入浸提冷凝管內(nèi)，當(dāng)確信套筒已被磁鐵吸牢后取下套簡(jiǎn)夾。

d.用分析天平稱浸提杯重量(m₂)，然后加入約50mL無(wú)水乙mi，用杯托將6個(gè)浸提杯放在加熱板上，再將冷凝管提升機(jī)構(gòu)搬下，使浸提懷與冷凝管連接好。

e.事先接通浸提冷凝管的冷卻水，將濾紙筒置于“沸騰”位置。冷凝管應(yīng)有良好的冷凝作用；

f.無(wú)水乙mi沸騰15min或30min(依樣品含油量而異)后，將濾紙筒提升到“沖洗”位置，沖洗30min或45min。

g.沖洗結(jié)束后，關(guān)閉冷凝管旋塞閥，回收乙mi。

h.松開(kāi)冷凝管提升機(jī)構(gòu)，取下浸提杯，并放入烘箱烘干。

i.在干燥器中冷卻浸提杯，然后用分析天平稱重(m₃)。

j.按以下公式計(jì)算樣品中粗脂肪含量。

②測(cè)定結(jié)果的計(jì)算

粗脂肪＝W₃－W₂×*

                  W₁

式中 ：W₁——風(fēng)干試樣重量，g。

W₂ ——已恒重的浸提杯重量，g。

W₃——己恒重的盛有脂肪的浸提杯重量，g。

6.3.3.7  重復(fù)性每個(gè)試樣取兩平行樣進(jìn)行測(cè)定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果。粗脂肪含量在10%以上(含10%)允許相對(duì)偏差為3%。粗脂肪含量在10%以下時(shí)，允許相對(duì)偏差為5%。

【實(shí)訓(xùn)作業(yè)及思考題】

1.測(cè)定混合飼料、配合飼料、濃縮飼料或單一飼料中粗脂肪的含量，并寫出實(shí)訓(xùn)報(bào)告。

2.脂肪包的高度超過(guò)虹吸高度對(duì)測(cè)定結(jié)果有何影響？為什么？

3.脂肪測(cè)定儀對(duì)飼料脂肪的測(cè)定有何優(yōu)點(diǎn)?

4.對(duì)測(cè)定后放入105℃±2℃烘箱中需干燥的包、瓶或杯有何要求？

5.測(cè)定后包、瓶或杯在105℃±2℃烘箱內(nèi)的干燥時(shí)間為什么不能過(guò)長(zhǎng)?過(guò)長(zhǎng)是否會(huì)影響測(cè)定結(jié)果?

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