關于大鼠ELISA試劑盒HIV測定過程
1 配液：ELISA試劑盒將50ml濃縮洗刷液用蒸餾水或去離子水20倍稀釋至1000ml備用。
2 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板設陰性對照3孔、陽性對照Ⅰ型、Ⅱ型各1孔，空白對照1孔。
3 加樣：分別在相應孔加入待檢標本、陰性、陽性對照100μl，用封板膜封板后置37℃溫育30min。
4 洗刷：當心把封板膜揭去，用洗板機挑選5次程序，洗板后拍干。
5 加酶：每孔加酶結合物100μl(空白對照孔除外)，充沛混勻，用封板膜封板后置37℃溫育30min。
6 洗刷：當心把封板膜揭去，用洗板機挑選5次程序，洗板后拍干。
7 顯色：每孔加入顯色劑A液和B液各50μl，悄悄振動混勻，封板后置37℃避光顯色15min。
8 測定：每孔加終止液50μl，悄悄振動混勻。設定酶標儀波長為450nm(建議使用雙波長的酶標儀比色，參閱波長630 nm)，空白調(diào)零，讀取各孔OD值。
9 判斷成果：核算臨界值(cut-off)(CO)值。 臨界值=陰性對照A均值+0.12 正常情況下，陰性對照孔的OD值≤0.10(若1孔陰性對照的OD值>0.1應放棄，若有2孔或2孔以上陰性對照的OD值>0.1，應重復實驗。)。樣品OD值<臨界值者為HIV抗體陰性。
正常情況下，陽性對照孔的OD值≥0.80(若1孔陽性對照的OD值<0.8應放棄，若有2孔或2孔以上陽性對照的OD值<0.8，應重復實驗。樣品OD值≥臨界值者為HIV抗體陽性。
ELISA試劑盒注意：關于篩查陽性標本，應從頭取樣雙孔復試，復試陽性者應按照《全國*管理規(guī)范》送HIV確證實驗室進行確證實驗。 質(zhì)量操控： 每塊板設陰陽性及空白對照，并于每次實驗用克己質(zhì)控血清作質(zhì)控，將質(zhì)控血清孔OD值采用“即刻法"核算或標在質(zhì)控圖上，如質(zhì)控有效，標明實驗牢靠；如失控，則要查看試劑效期、貯藏溫度、試 驗溫度是否正常、操作過程是否正確，直至從頭實驗使其在控。
