人激活素A(Activin A)ELISA試劑盒說明書
 

　　實(shí)驗(yàn)原理
 

　　是采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被兔α2巨球蛋白(A2M)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的兔α2巨球蛋白(A2M)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，計(jì)算樣品濃度。
 

　　樣本處理要求
 

　　1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
 

　　2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
 

　　3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
 

　　4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
 

　　5.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
 

　　6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能人上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
 

　　7.不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
 

　　品優(yōu)勢(shì)
 

　　1.  品種齊全、質(zhì)量可靠、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、穩(wěn)定性好。
 

　　2. 特異性強(qiáng)：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
 

　　3. 重復(fù)性好：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。
 

　　4. 同城(上海)需要代測(cè)可免費(fèi)上門取樣，享送貨上門服。
 

　　5. 根據(jù)客戶需求專業(yè)定制elisa試劑盒并提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)。
 

　　6. 臻科生物可提供專業(yè)技術(shù)服務(wù),全方為您解決實(shí)驗(yàn)進(jìn)程中所遇到一切實(shí)驗(yàn)問題。
 

　　四、ELISA試劑盒組成
 

　　名稱
 

　　96孔配置
 

　　48孔配置
 

　　備注
 

　　微孔酶標(biāo)板
 

　　8孔×12條
 

　　8孔×6條
 

　　無
 

　　標(biāo)準(zhǔn)品
 

　　0.3mL*6管
 

　　0.3mL*6管
 

　　無
 

　　*
 

　　6mL
 

　　3mL
 

　　無
 

　　檢測(cè)抗體-HRP
 

　　10mL
 

　　5mL
 

　　無
 

　　20×洗滌緩沖液
 

　　25mL
 

　　15mL
 

　　按說明書進(jìn)行稀釋
 

　　底物A
 

　　6mL
 

　　3mL
 

　　無
 

　　底物B
 

　　6mL
 

　　3mL
 

　　無
 

　　終止液
 

　　6mL
 

　　3mL
 

　　無
 

　　封板膜
 

　　2張
 

　　2張
 

　　無
 

　　說明書
 

　　1份
 

　　1份
 

　　無
 

　　自封袋
 

　　1個(gè)
 

　　1個(gè)
 

　　無
 

　　注意事項(xiàng)
 

　　1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
 

　　2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
 

　　3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。
 

　　4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
 

　　5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。
 

　　6. 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
 

　　7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
 

　　8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
 

　　9. 不能使用過期產(chǎn)品。
 

　　10. 實(shí)驗(yàn)還需要酶標(biāo)儀(450nm)，37℃恒溫箱，高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL以及蒸餾水或去離子水。
 

　　11. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。
 

　　12. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
 

　　13. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。
 

　　操作步驟
 

　　1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
 

　　2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
 

　　3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。
 

　　4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
 

　　5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液(350μL)，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
 

　　6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
 

　　7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
 

　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算
 

　　以所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計(jì)算出樣品的濃度。
 

　　八、關(guān)于兔α2巨球蛋白(A2M)定量ELISA試劑盒的特別說明
 

　　公司*專業(yè)供應(yīng)各類科研產(chǎn)品，包括ELISA試劑盒、農(nóng)殘?jiān)噭┖小⒎琶庠噭┖?、生物試劑、檢測(cè)卡等優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。