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　　分光光度計，又稱光譜儀(spectrometer)，是將成分復雜的光，分解為光譜線的科學儀器。測量范圍一般包括波長范圍為380~780 nm的可見光區(qū)和波長范圍為200~380 nm的紫外光區(qū)。不同的光源都有其的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的380~780nm波長的光譜光通過三棱鏡折射后，可得到由紅、橙、黃、綠、藍、靛、紫組成的連續(xù)色譜;該色譜可作為可見光分光光度計的光源。
 

　　光度定義
 

　　分光光度法是在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度，對該物質(zhì)進行定性或定量分析。常用的波長范圍為:(1)200~380nm的紫外光區(qū)，(2)380~780nm的可見光區(qū)，(3)2.5~25μm(按波數(shù)計為4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計(或比色計)、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。
 

　　原理
 

　　分光光度計采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長的光源，光線透過測試的樣品后，部分光線被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
 

　　單色光輻射穿過被測物質(zhì)溶液時，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比，其關(guān)系如下式:
 

　　A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc
 

　　式中 :A 為吸光度;
 

　　I。為入射的單色光強度;
 

　　I 為透射的單色光強度;
 

　　T 為物質(zhì)的透射率;
 

　　k 為摩爾吸收系數(shù);
 

　　L 為被分析物質(zhì)的光程，即比色皿的邊長;
 

　　c 為物質(zhì)的濃度;
 

　　物質(zhì)對光的選擇性吸收波長，以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后可用同樣條件將該供試品配成溶液，測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見光區(qū)，除某些物質(zhì)對光有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時影響呈色深淺的因素較多，且常使用單色光純度較差的儀器，故測定時應(yīng)用標準品或?qū)φ掌吠瑫r操作。
 

　　維護保養(yǎng)
 

　　分光光度計作為一種儀器，在運行工作過程中由于工作環(huán)境，操作方法等種種原因，其狀況必然會發(fā)生某些變化，可能影響設(shè)備的性能，甚至誘發(fā)設(shè)備故障及事故。因此，分析工作者了解分光光度計的基本原理和使用說明，并能及時發(fā)現(xiàn)和排除這些隱患，對已產(chǎn)生的故障及時維修才能保證儀器設(shè)備的正常運行。
 

　　1)若大幅度改變測試波長，需稍等片刻，等燈熱平衡后，重新校正"0"和""點。然后再測量。
 

　　2)指針式儀器在未接通電源時，電表的指針位于零刻度上。若不是這種情況，需進行機械調(diào)零。
 

　　3)比色皿使用完畢后，請立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。
 

　　4)操作人員不應(yīng)輕易動燈泡及反光鏡燈，以免影響光效率。
 

　　5)分光光度計，由于其光電接收裝置為光電倍增管，它本身的特點是放大倍數(shù)大，因而可以用于檢測微弱光電信號，而不能用來檢測強光。否則容易產(chǎn)生信號漂移，靈敏度下降。針對其上述特點，在維修、使用此類儀器時應(yīng)注意不讓光電倍增管長時間暴露于光下，因此在預熱時，應(yīng)打開比色皿蓋或使用擋光桿，避免長時間照射使其性能漂移而導致工作不穩(wěn)。
 

　　6)放大器靈敏度換擋后，重新調(diào)零。
 

　　7)比色杯的配套性問題。比色杯配套使用，否則將使測試結(jié)果失去意義。在進行每次測試前均應(yīng)進行比較。具體方法如下;分別向被測的兩只杯子里注入同樣的溶液，把儀器置于某一波長處，石英比色杯;220nm、700nm裝蒸餾水，玻璃比色杯:700nm處裝蒸餾水，將某一個池的透射比值調(diào)至，測量其他各池的透射比值，記錄其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的范圍內(nèi)則可以配套使用，若超出此范圍應(yīng)考慮其對測試結(jié)果的影響。
 

　　分光光度計分操作中容易出現(xiàn)的幾個典型故障及其排除方法:
 

　　1)儀器不能調(diào)零。可能原因:
 

　　a)光門不能關(guān)閉。解決方法:修復光門部件，使其關(guān)閉。
 

　　b)透過率""旋到底了。解決方法:重新調(diào)整""旋鈕。
 

　　c)儀器嚴重受潮。解決方法:可打開光電管暗盒，用電吹風吹上一會兒使其干燥，并更換干燥劑。
 

　　d)電路故障。解決方法:送修理，檢修電路。
 

　　2)儀器不能調(diào)""?？赡茉?
 

　　a)光能量不夠。解決方法:增加靈敏度倍率檔位，或更換光源燈(盡管燈還亮)。
 

　　b)比色皿架未落位。解決方法:調(diào)整比色皿架使其落位。
 

　　c)光電轉(zhuǎn)換部分老化。解決方法:更換部件。
 

　　d)電路故障。解決方法:調(diào)修電路。
 

　　3) 測量過程中,""點經(jīng)常變動?？赡茉?
 

　　a)比色皿在比色皿架中放置的位置不一致，或其表面有液滴。解決方法:用擦鏡紙擦干凈比色皿表面，然后將其安放在比色槽的左邊，上面用定位夾定位。
 

　　b)電路故障(電壓、光電接收、放大電路)。解決方法:送修。
 

　　4)數(shù)顯不穩(wěn)?？赡茉?
 

　　a)預熱時間不夠。解決方法:延長預熱時間至30分鐘左右(部分儀器由于老化等原因，長時間處于工作狀態(tài)時，也會工作不穩(wěn))。
 

　　b)光電管內(nèi)的干燥劑失效，使微電流放大器受潮。解決方法:烘烤電路，并更換或烘烤干燥劑。
 

　　c)環(huán)境振動過大、光源附近空氣流速大、外界強光照射等。解決方法:改善工作環(huán)境。
 

　　d)光電管、電路等其它原因。解決方法:送修。
 

　　五、提高分光光度計透射比檢定及使用精度的幾種方法
 

　　在分光光度計的使用或檢定中,透射比(吸光度)的準確度是衡量儀器工作性能的一項重要指標,它的準確程度直接關(guān)系到所測數(shù)據(jù)的可信性及科學性。所以提高此項指標的使用及檢定準確度顯得尤為重要。