一、培養(yǎng)基的滅菌及使用
(1)每次配置時(shí)，要注意其生產(chǎn)日期是否在保質(zhì)期內(nèi)，查看其開瓶日期及瓶口密封性，保證其未變質(zhì)，并且未吸潮。
(2)培養(yǎng)基配置時(shí)，稱量要準(zhǔn)確，包括鹽水的分裝要準(zhǔn)確。
(3)一定要保證現(xiàn)配制現(xiàn)滅菌，未滅菌的配好培養(yǎng)基不能長(zhǎng)時(shí)間放置，更不可隔夜。
(4)滅菌時(shí)要保證恒溫、恒壓，同時(shí)要保證有效滅菌時(shí)間。
(5)滅菌過(guò)的培養(yǎng)基要冰箱保存，可保存一周，一般不超過(guò) 3 天。而且要遵循“先入先出”原則，先配制的要先使用。
(6)在使用時(shí)，要根據(jù)當(dāng)班次的使用量，用水浴鍋先將培養(yǎng)基溶化為液態(tài)，然后及時(shí)調(diào)低水域溫度(先化好的可從水域取出，放在水浴鍋鍋蓋上)待用，千萬(wàn)不可長(zhǎng)時(shí)間使培養(yǎng)基處于高溫狀態(tài)。
(7)做產(chǎn)品微生物檢測(cè)時(shí)，傾倒培養(yǎng)基溫度在 45℃左右，不可過(guò)燙，避免將菌燙死；也不可過(guò)涼，化好的培養(yǎng)基又結(jié)塊凝固，不便于觀察結(jié)果。
(8)每瓶培養(yǎng)基均要做空白。
(9)盡量集中做樣，避免頻繁打開同一瓶培養(yǎng)基瓶塞，增大培養(yǎng)基的污染幾率，出現(xiàn)誤差結(jié)果。
(10)培養(yǎng)基剩余過(guò)少時(shí)，可先將其傾倒成空白用板。
二、 做樣環(huán)境的維持
(1)大環(huán)境(房間)
1)做樣時(shí)，窗戶和空調(diào)要關(guān)閉，或用酒精對(duì)房間進(jìn)行噴霧消毒，避免房間內(nèi)空氣流通影響超凈臺(tái)內(nèi)部環(huán)境(在有通排風(fēng)系統(tǒng)的恒溫恒濕無(wú)菌間進(jìn)行操作)。
2)如果在原來(lái)的原料微生物檢測(cè)室進(jìn)行做樣，要定期開啟紫外燈，對(duì)房間進(jìn)行殺菌。
(2)小環(huán)境(超凈臺(tái))
1)定期清潔初效過(guò)濾器，要及時(shí)更換。
2)做樣前，將超凈臺(tái)內(nèi)部進(jìn)行清潔，用 75%酒精進(jìn)行擦拭消毒，并提前半小時(shí)將超凈臺(tái)紫外燈打開，對(duì)超凈臺(tái)內(nèi)部環(huán)境進(jìn)行殺菌。
3)關(guān)紫外燈，開風(fēng)機(jī)，調(diào)整合適進(jìn)風(fēng)量，風(fēng)量不可過(guò)低。
4)每次做樣后，要對(duì)超凈臺(tái)內(nèi)部進(jìn)行清理、清潔，并用 75%酒精進(jìn)行擦拭消毒。
5)紫外燈根據(jù)其使用壽命要及時(shí)更換。
6)做樣同時(shí)，要做上相應(yīng)菌落檢測(cè)的環(huán)境空白。
7)做樣區(qū)域的選擇：
a、一般在距離超凈臺(tái)外沿的 1/3-2/3 區(qū)域進(jìn)行無(wú)菌操作；
b、要在酒精燈火焰的外焰保護(hù)區(qū)域進(jìn)行操作。
三、 工器具的潔凈度
(1)玻璃器皿：采用干熱滅菌方式進(jìn)行滅菌。
(2)做樣用剪刀、勺子等物品要做到做樣，不可與其它操作器具混用，使用時(shí)，先用75%酒精消毒，再采用灼燒方式進(jìn)行滅菌。
(3)接種針(環(huán))采用灼燒方式進(jìn)行滅菌，但要注意做樣時(shí)要先將接種針(環(huán))進(jìn)行冷卻。
四、樣品的采集及檢測(cè)
(1)保證采樣器具的無(wú)菌性
1)玻璃器皿：采用干熱滅菌方式進(jìn)行滅菌，保證恒溫、時(shí)間足夠(但不可時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，導(dǎo)致玻璃器皿易裂紋而報(bào)廢)。
2)取樣筐：使用前要用 75%酒精進(jìn)行噴灑消毒
3)取樣勺、濃奶取樣提子：要保證其清潔消毒，清潔后用 75%酒精進(jìn)行擦拭消毒。
4)取樣袋：可現(xiàn)用酒精進(jìn)行擦拭消毒，再在超凈臺(tái)用紫外燈照射消毒，(包裝車間要在傳遞窗用紫外燈照射消毒)。
5)電子稱表面用 75%酒精消毒。
(2)人員操作
1)保證手部的清洗、消毒：取樣前及做樣前都要先洗手再消毒。
2)取樣要具有代表性(隨機(jī)樣、目的樣、綜合樣)且要標(biāo)示清楚。
3)取樣完畢，不可在車間逗留，要及時(shí)將樣品放入超凈臺(tái)，對(duì)其外表面進(jìn)行紫外燈照射消毒。
4)在要求的做樣區(qū)域進(jìn)行操作。
5)做樣前，要用 75%酒精棉球?qū)悠反诓窟M(jìn)行擦拭消毒，再開口。
6)往鹽水瓶加樣品時(shí)，要注意勺子或袋子盡量不接觸瓶口。
7)樣品計(jì)量要準(zhǔn)確，稀釋倍數(shù)也要準(zhǔn)確(1mL 吸管不允許將管口敲掉)，進(jìn)行 100 倍稀釋時(shí)，1mL 吸管要伸入鹽水中，不可以將樣品管壁流下去，同時(shí)要避免將管底部捅破。
8)鹽水溫度以 40℃左右為宜，不能過(guò)熱，將部分微生物燙死，也不能溫度太低，不能將奶粉溶解*。
9)進(jìn)行稀釋時(shí)，要搖勻，保證溶液的均一性。
10)傾倒平皿時(shí)，要注意培養(yǎng)基瓶口不要接觸到平皿；傾倒的培養(yǎng)基要適量，不可以太少，在培養(yǎng)過(guò)程中干掉，微生物亦死亡，以 15mL 左右為宜。
11)做大腸菌群樣時(shí)，要提前將乳糖膽鹽培養(yǎng)基培養(yǎng)管按需要量備好，放入超凈臺(tái)對(duì)外表面進(jìn)行紫外線滅菌。
12)接二步時(shí)，要注意先將接種針(環(huán))進(jìn)行冷卻，避免出現(xiàn)接不上菌落的情況發(fā)生，導(dǎo)致無(wú)法判斷、確認(rèn)。
13)做樣完畢，及時(shí)放入相應(yīng)培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)，并清理清潔超凈臺(tái)。
五、 微生物的培養(yǎng)
(1)在培養(yǎng)過(guò)程中，要隨時(shí)監(jiān)控培養(yǎng)箱溫度，保證其在適宜的溫度進(jìn)行培養(yǎng)。
(2)要按照《微生物檢驗(yàn)規(guī)范》要求及時(shí)觀察結(jié)果，出現(xiàn)異常，要及時(shí)分析原因進(jìn)行反饋。
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