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江瑤青毒素G CRM-PnTX標(biāo)準(zhǔn)品是一組快速反應(yīng)的環(huán)亞胺毒素，最初在亞洲貝類(lèi)中被發(fā)現(xiàn)[1-5]。隨后，在澳大利亞和新西蘭的蟲(chóng)魚(yú)中檢測(cè)到了許多新的PnTX類(lèi)似物[6]。PnTXs是由一種最初在地中海分離的甲藻Vulcanodariumrugosum[7]生產(chǎn)的。最近的研究表明，江瑤青毒素G CRM-PnTX標(biāo)準(zhǔn)品在挪威[9]和加拿大[10]的貝類(lèi)中廣泛存在，PnTX-G是PnTX-G的主要類(lèi)似物。

江瑤青毒素G CRM-PnTX標(biāo)準(zhǔn)品是一種經(jīng)認(rèn)證的校準(zhǔn)液，用于PnTX-G的分析方法開(kāi)發(fā)和精確定量，其濃度使其適合于制備液相色譜(LC)和液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)儀器校準(zhǔn)的稀釋系列，并可用于添加貨架控制樣品以進(jìn)行回收率試驗(yàn)。

儲(chǔ)存和使用說(shuō)明

為確保江瑤青毒素G CRM-PnTX標(biāo)準(zhǔn)品的穩(wěn)定性，這種材料應(yīng)在-12°C或以下未打開(kāi)，同樣，任何稀釋劑都應(yīng)儲(chǔ)存在-12°C或以下的低頂空區(qū)。

在開(kāi)啟前，每個(gè)安瓿應(yīng)被允許加熱到室溫和含量充分混合。安瓿應(yīng)在預(yù)先評(píng)分的標(biāo)志打開(kāi)。一旦一個(gè)安瓿被打開(kāi)，準(zhǔn)確的別名應(yīng)用校準(zhǔn)的容量設(shè)備移除，并轉(zhuǎn)移到容量瓶或小瓶中。當(dāng)江瑤青毒素G CRM-PnTX標(biāo)準(zhǔn)品溶液打開(kāi)超過(guò)幾分鐘時(shí)，由于甲醇的蒸發(fā)而使?jié)舛仍黾?。建議由于玻璃表面的潛在損失，不應(yīng)將CRM-PnTX-G的溶液蒸發(fā)為干燥。注：溶液體積不確定。因此，安瓿的全部?jī)?nèi)容不應(yīng)簡(jiǎn)單地轉(zhuǎn)移到容量瓶和稀釋成體積。

江瑤青毒素G CRM-PnTX標(biāo)準(zhǔn)品的制備

PnTX-G是在新西蘭Cawthron研究所從南澳大利亞采集的天然污染的太平洋牡蠣(Crassostrea Gigas)中分離得到的.[6].PnTX-G在制備CRM-PnTX-G中的結(jié)構(gòu)和純度經(jīng)1‘H NUCciEAR核磁共振(圖1)證實(shí).AnLC-MSiMS產(chǎn)物離子譜顯示PnTX-G具有PnTX-G的特性(圖2).LC-MSs也用于PnTX-G原液的總純度估算(3 Hyperum Hypersil BDS C8柱，150×2.1 mm)；流動(dòng)相為水(A)和乙腈/水(95i5)(B)，各含2mm甲酸銨和50 mm甲酸(pH 2.3)，200μl/min梯度洗脫10%~100%Bover 20 min，柱溫+20℃，無(wú)主要雜質(zhì)。然而，檢測(cè)到少量與PnTX有關(guān)的雜質(zhì)([M+H]*=m/z 708)(圖3)。在等容條件下，PnTX雜質(zhì)相對(duì)于PnTX-G的總比例<0.1%(柱：1.9um Hypersil Gold C18，50×2.1mm，A，B溶劑，300 ul/min，35%B，+20°C柱溫度)。

江瑤青毒素G CRM-PnTX標(biāo)準(zhǔn)品以純PnTX-G為原料，在Cd；OH中溶解，制備了一種天然溶液，用于定量核磁共振。通過(guò)在高純甲醇(含0.01%醋酸)中對(duì)原液進(jìn)行準(zhǔn)確稀釋?zhuān)苽淞薈RM溶液。該溶液與聚四氟乙烯攪拌器和磁混合器充分混合，然后在冰浴中在氬氣氛下冷卻，然后將其分配到充滿(mǎn)氬的干凈的琥珀玻璃安瓿中，然后立即進(jìn)行火焰密封。

穩(wěn)定性研究

對(duì)江瑤青毒素G CRM-PnTX標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行了短期和長(zhǎng)期等時(shí)穩(wěn)定性研究[11]，在30天的時(shí)間內(nèi)，在+37℃的溫度下沒(méi)有發(fā)現(xiàn)降解現(xiàn)象，表明在短期內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。然而，在長(zhǎng)期研究中，這種溫度下的降解在9個(gè)月時(shí)間點(diǎn)確實(shí)變得顯著。對(duì)在儲(chǔ)存溫度前計(jì)算的1年長(zhǎng)期穩(wěn)定性數(shù)據(jù)進(jìn)行了回歸，發(fā)現(xiàn)在所有條件下，在+4°C以下的情況下，不確定度都是微不足道的。利用-12°C斜率的標(biāo)準(zhǔn)誤差，確定了與長(zhǎng)期穩(wěn)定性(UNS)評(píng)估相關(guān)的不確定度，將其納入最終的不確定度。

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