分析型超速離心技術(Analytical Ultracentrifugation,AUC)是表征生物大分子特性、研究生物分子理化性質的主要技術手段之一,用于分析樣品異質性、聚集體的形成以及分子間相互作用等。瑞典科學家Theoder Svedberg在1925年發(fā)明這一技術,并于第二年制造出*分析型超速離心機。經(jīng)過近百年的應用、驗證和發(fā)展,目前這一技術已廣泛應用于生物制藥、生命科學及高分子科學等研究領域。
貝克曼推出的Optima AUC分析型超速離心機由主機、光學系統(tǒng)、轉頭以及樣本池組件等構成,可以想象成是一臺制備型超速離心機和光學檢測系統(tǒng)的結合,但不同于制備型離心機,Optima AUC作為分析型儀器可以實時監(jiān)測樣品沉降過程中溶質濃度隨時間和距離的改變,從而計算得到分子特性。
分析型超速離心技術的分析方法主要有沉降速率(Sedimentation Velocity)和沉降平衡(Sedimentation Equilibrium)兩種。
沉降速率是一項流體動力學技術。沉降速率實驗中,樣品被高速旋轉,溶質分子向樣品池底部移動,通過記錄的數(shù)據(jù)來測定溶質分子運動的速率。運動速率用沉降系數(shù)表示,它取決于分子量、分子形狀或構象。對于不同組分的樣品,根據(jù)不同的沉降系數(shù)檢測每個組分。
沉降平衡是一項熱力學技術。沉降平衡試驗在較低的轉速下進行,當沉降作用與擴散作用達到平衡時測定分子平衡濃度的分布。在平衡狀態(tài)下,濃度的分布只決定于質量而與分子的形狀無關。離心開始時,分子顆粒發(fā)生沉降,一段時間以后,沉降的結果造成了濃度梯度,因而產(chǎn)生了蛋白質分子反向擴散運動,當反向擴散與離心沉降達到平衡時,濃度分布固定不變。
掃描得到沉降數(shù)據(jù)后,通過后續(xù)軟件分析可得到樣品表征結果,目前普遍應用SEDFIT/SEDPHAT分析軟件。下圖為沉降速率數(shù)據(jù)分析擬合后得到的c(S)分布圖,根據(jù)分析結果可精準檢測生物大分子聚集狀態(tài)以及聚集體準確百分比含量。
揭開了AUC的神秘面紗,我們已經(jīng)了解到分析超速離心技術在蛋白藥物聚集體檢測方面有其*優(yōu)勢,不需要標準品與標記物,直接檢測終溶液中樣品狀態(tài),更接近蛋白質真實生理狀態(tài)等。
AUC在表征抗體藥物特性時有如下多方面應用,具體應用實例介紹請關注下期內容!
● 精準檢測抗體藥物聚集體
● 抗體藥物制劑篩選
● 表征抗體偶聯(lián)藥物結合效率
● 抗原——抗體相互作用檢測
● 批次一致性檢測
* 以上涉及到所有產(chǎn)品僅用于科研和工業(yè),不用于臨床診斷。
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