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　　zui近，小貝家分別在北京和廣州舉辦了“細(xì)胞外囊泡專題研討班”，獲得老師和同學(xué)們熱情的參與，有的甚至千里迢迢、不遠(yuǎn)*專程參加。
 

　　是什么引起大家如此高漲的參與熱情呢？
 

　　當(dāng)前研究的熱點(diǎn)——外泌體。
 

　　對(duì)于外泌體(又稱細(xì)胞外囊泡，Extracellular Vesicles)，相信大家都不陌生，它是指細(xì)胞膜上脫落或由細(xì)胞分泌的，具有雙層膜結(jié)構(gòu)囊泡狀異質(zhì)性群體，包括外泌體(Exs)、膜微粒(MP)和微囊泡(EVs)。細(xì)胞外囊泡和細(xì)胞內(nèi)囊泡，有著相似的磷脂雙分子層結(jié)構(gòu)，包含有蛋白和核酸等生物大分子，大小在40nm-1000nm，是細(xì)胞進(jìn)行物質(zhì)運(yùn)輸、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、實(shí)現(xiàn)生理功能的重要工具。細(xì)胞外囊泡廣泛存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清及各種體液，參與細(xì)胞間通訊、細(xì)胞遷移和免疫調(diào)節(jié)等多種反應(yīng)。囊泡水平升高與糖尿病、艾滋病以及癌癥等疾病相關(guān)，有望成為這類疾病的診斷及評(píng)估疾病預(yù)后標(biāo)志物。如今，越來越多的研究者開始著眼于對(duì)細(xì)胞外囊泡進(jìn)行準(zhǔn)確的定型和定量研究。2013年10月7日，諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)授予了發(fā)現(xiàn)細(xì)胞囊泡運(yùn)輸調(diào)控機(jī)制的三位科學(xué)家。
 

　　外周血中有著大量的外泌體，來自不同的細(xì)胞。另外，外泌體和腫瘤微環(huán)境、腫瘤細(xì)胞遷移有著神秘。對(duì)于這些未知的領(lǐng)域，目前還缺乏研究，主要原因在于對(duì)于這種200nm以下顆粒的檢測(cè)，顯微鏡顯得力不從心，電鏡又高不可及。因此強(qiáng)大的工具和的解決方案的顯得尤其重要。
 

　　有鑒于此，我們有幸邀請(qǐng)到了來自 Beth Israel Deaconess Medical Center and Harvard Medical School的Vasilis Toxavidis和John Tigges——兩位有著豐富的流式細(xì)胞術(shù)和外泌體研究經(jīng)驗(yàn)的學(xué)者，請(qǐng)他們和國(guó)內(nèi)的學(xué)者進(jìn)行外泌體研究的交流，分享經(jīng)驗(yàn)。
 

　　8月24日，首都北京，驕陽(yáng)似火，然而參加“貝克曼庫(kù)爾特細(xì)胞外囊泡專題研討班-北京站”活動(dòng)的老師和同學(xué)，有著勝似驕陽(yáng)的熱情，有圖為證。現(xiàn)場(chǎng)不得不臨時(shí)加座，才能滿足大家學(xué)習(xí)和交流的熱情。
 

　　8月29日，羊城廣州，驟雨初歇，寒潮來襲，公路上隨處可見臺(tái)風(fēng)肆略的痕跡，這些卻絲毫沒有阻擋來自全國(guó)各地的40多位老師的腳步。大家齊聚中山大學(xué)，熱情參與我們廣州站的活動(dòng)。
 

　　兩場(chǎng)研討班，早上均為報(bào)告部分。Vasilis Toxavidis和John Tigges從理論角度講述了外泌體檢測(cè)的問題、誤區(qū)和解決方案；從散射光檢測(cè)原理、流式細(xì)胞儀硬件、再到樣本制備，系統(tǒng)的闡述了外泌體的檢測(cè)，并以實(shí)例講述了心肌細(xì)胞源外泌體和紅細(xì)胞源外泌體的研究結(jié)果，提出了Nano Flow Cytometry(NanoFACS)的概念。
 

　　首先，來自美國(guó)哈佛干細(xì)胞研究所資源總監(jiān)、哈佛醫(yī)學(xué)院貝斯以色列女執(zhí)事醫(yī)療中心流式技術(shù)平臺(tái)負(fù)責(zé)人Vasilis Toxavidis先為大家做了流式分析EVs的技術(shù)原理、硬件可行性等方面的報(bào)告。Vasilis以MoFloXDP和CytoFLEX為教學(xué)案例，深入淺出地講解，時(shí)時(shí)博得與會(huì)者的掌聲，給大家提供了流式在微顆粒檢測(cè)研究的新思路。
 

　　隨后，美國(guó)哈佛醫(yī)學(xué)院貝斯以色列女執(zhí)事醫(yī)療中心外囊泡檢測(cè)中心主任John Tigges進(jìn)一步介紹了利用流式細(xì)胞術(shù)研究細(xì)胞外囊泡， 并結(jié)合HF患者EVs檢測(cè)案例，抽絲剝繭，逐一分析如何解決細(xì)胞外囊泡檢測(cè)中問題、缺陷，闡述EVs在疾病研究中的實(shí)際意義，使大家茅塞頓開。其幽默的演講風(fēng)格也深受老師們喜愛，引得臺(tái)下提問連連，將整個(gè)研討會(huì)推上了小高潮。
 

　　接著，來自貝克曼庫(kù)爾特生命科學(xué)部的霍德華，講述了貝克曼庫(kù)爾特的超高速離心機(jī)——Optima XPN在樣本制備和外泌體獲取方面的完整工作流程。超速離心分離，是從生物體液和細(xì)胞培養(yǎng)樣品中分離純化外泌體的黃金標(biāo)準(zhǔn)，可以準(zhǔn)確地重復(fù)獲取外泌體，同時(shí)zui大限度減少蛋白質(zhì)聚集體和其他膜離子的共純化。
 

　　上午的理論部分結(jié)束后，大家對(duì)細(xì)胞外囊泡檢測(cè)，超離技術(shù)助力樣本采集和流式技術(shù)助力囊泡研究有了全面、清晰、深刻的認(rèn)識(shí)。
 

　　北京站的實(shí)驗(yàn)操作部分，在中科院過程工程研究所的、陣容強(qiáng)大的三臺(tái)CytoFLEX流式細(xì)胞分析儀旁展開。John Tigges和Vasilis Toxavidis現(xiàn)場(chǎng)演示了如何在CytoFLEX上進(jìn)行外泌體的檢測(cè)。利用CytoFLEX的WDM技術(shù)和靈活的濾光片調(diào)整特點(diǎn)，John Tigges輕松實(shí)現(xiàn)200nm以下的顆粒檢測(cè)，并找到外周血中神秘的外泌體。
 

　　CytoFLEX使用VSSC檢測(cè)Megamix-Plus微球結(jié)果及線性表現(xiàn)：
 

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　　由于FAPD的優(yōu)勢(shì)CytoFLEX對(duì)顆粒大小的檢測(cè)保持很好的線性。出眾的分辨率不僅能將噪音與細(xì)胞外囊泡很好的分開，而且還可以對(duì)外囊泡群體進(jìn)行細(xì)分，分別研究其抗體表達(dá)情況。
 

　　廣州站的實(shí)踐操作部分在中山大學(xué)北校區(qū)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。大家在兩位美國(guó)專家的指導(dǎo)下，領(lǐng)略了MoFlo Astrios EQ和CytoFLEX檢測(cè)細(xì)胞外囊泡的神奇魅力。EVs的大小通常只有40nm-100nm，超出傳統(tǒng)流式的檢測(cè)范圍。但MoFlo Astrios EQ的增強(qiáng)型雙前向角設(shè)計(jì)和CytoFLEX的雪崩光電二極管以超高的分辨率和靈敏度，有效地區(qū)分噪音信號(hào)和檢測(cè)囊泡。連續(xù)五輪操作培訓(xùn)，讓操作者切身感受了一把迅速快捷、多參數(shù)細(xì)胞外囊泡檢測(cè)。
 

　　兩場(chǎng)培訓(xùn)班內(nèi)容豐富、實(shí)用，而又易于理解。到會(huì)的老師和同學(xué)紛紛表示獲益匪淺。貝克曼庫(kù)爾特的超高速離心機(jī)(Optima XPN)和超靈敏流式細(xì)胞儀(CytoFLEX)實(shí)現(xiàn)了雙劍合璧，為科研工作者提供了且可行的外泌體檢測(cè)解決方案。