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技術(shù)文章

液相色譜使用過程中的常見問題及解決方法

點擊次數(shù):365 發(fā)布時間:2014-12-13

液相色譜使用過程中的常見問題及解決方法:
 
液相色譜技術(shù),HPLC 是近期發(fā)展起來的一種具有高靈敏度、高選擇性的快速分離、分析技術(shù).它既能用于微量組分的分析測定,又能用于大量的制備分離,靈活多樣,應(yīng)用范圍已超過其它各種分離方法。如果HPLC使用人員能在分析樣品之時就熟悉常見的問題并加以解決,就能避免許多麻煩,讓您在HPLC使用過程中輕松應(yīng)對。
 
1 液相色譜儀系統(tǒng)
液相色譜儀主要由貯液瓶、泵、進(jìn)樣器、柱子、柱溫箱、檢測器、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成(見圖1)。對于整個系統(tǒng)而言,柱子、泵和檢測器是核心部件,同時也是易出問題的主要部位。
 
液相色譜儀常見問題及解決方法
液相色譜儀作為一種高精密儀器,如果在使用過程中操作不當(dāng)?shù)脑?就容易導(dǎo)致一些問題,其中zui常見的就是柱壓問題、漂移問題、峰形異常問題。

2.1 柱壓問題
柱壓問題是使用液相色譜過程中需要密切注意的地方,柱壓的穩(wěn)定與色譜圖峰形的好壞、柱效、分離效果及保留時間等密切相關(guān)。所謂柱壓穩(wěn)定并不是指壓力值穩(wěn)定于一個恒定值,而是指壓力波動范圍在345kPa以內(nèi)(在使用梯度洗脫時,柱壓平穩(wěn)、緩慢的變化是允許的)。壓力過高、過低都屬于柱壓問題。

2.1.1 壓力過高
這是液相色譜儀在使用中zui常見的問題,指的是壓力突然升高,一般都是由于流路中有堵塞的情況。此時,我們應(yīng)該分段進(jìn)行檢查。
①首先斷開真空泵的入口處,此時PEEK管里充滿液體,使PEEK管低于溶劑瓶,看液體是否自由滴下,如果液體不滴或緩慢滴下,則是溶劑過濾頭堵塞。處理方法:用30%的硝酸浸泡0.5h,在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下,溶劑過濾頭正常,再檢查。②打開Purge閥,使流動相不經(jīng)過柱子,如果壓力沒有明顯下降,則是過濾頭堵塞。處理方法:將過濾頭取出,用10%的異丙醇超聲30min。如果壓力降至690kPa以下,過濾頭正常,再檢查。③把色譜柱出口端取下,如果壓力不下降,則是柱子堵塞。處理方法:如果是緩沖鹽堵塞,則用95%的水沖至壓力正常;如果是一些強(qiáng)保留的物質(zhì)導(dǎo)致堵塞,則要用比現(xiàn)在流動相更強(qiáng)的流動相沖至壓力正常。假如按上面的方法長時間沖洗壓力都不下降,則可考慮將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上,用流動相沖洗柱子。這時,如果柱壓仍不下降,只有換柱子入口篩板,但一旦操作不慎,很容易造成柱效下降,所以盡量少用。

2.1.2 壓力過低
壓力過低的現(xiàn)象一般是由于系統(tǒng)泄漏,處理方法:尋找各個接口處,特別是色譜柱兩端的接口,把泄漏的地方旋緊即可。當(dāng)然還有一個原因就是泵里進(jìn)了空氣,但此時表現(xiàn)的往往是壓力不穩(wěn),忽高忽低,更嚴(yán)重一點會導(dǎo)致泵無法吸進(jìn)液體。處理方法:打開Purge閥,用3~5ml/min的流速沖洗,如果不行,則要用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出。

2.2 漂移問題
主要包括基線漂移和保留時間漂移。

2.2.1 基線漂移
一般說來,機(jī)器剛啟動時,基線容易漂移,大概要30min的平衡時間,如果用了緩沖溶液或緩沖鹽,還有就是在低波長下(220nm)平衡時間相對會比較長,但如果在實驗過程中發(fā)現(xiàn)基線漂移,則要考慮下面的原因(見表1)。
 
2.2.2 保留時間漂移
保留時間重現(xiàn)是液相性能好壞的一個重要標(biāo)志,同一種東西,兩次的保留時間相差不要超過15s,超過了30s可看做保留時間漂移,就無法進(jìn)行定性,要考慮以下原因(見表2)。
 
2.3 峰形異常問題  
峰形問題是液相的主要問題,在做液相過程中,我們就是要變換不同的條件來改善不好的峰形,對于各種各樣的異常峰,要區(qū)別對待
 

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