Phos-tag（TM） Agarose Phos-tag 瓊脂糖 用于分離，純化和富集磷酸化蛋白質(zhì)的全新方法。 這種方法的基礎(chǔ)是金屬固化親和層析（IMAC），使用磷酸結(jié)合標記分子（雙核鋅（II）絡(luò)合物），該標記分子接在高度交聯(lián)的瓊脂糖上（Phos-tag瓊脂糖）。相關(guān)產(chǎn)品貨號 302-93561; 308-93563。

Phos-tag^™ 瓊脂糖 Phos-tag^™ Agarose

Phos-tag^™ Agarose

Phos-tag^™是由廣島大學高分子科學系開發(fā)的一種中性pH環(huán)境(生理pH)下的新型磷酸結(jié)合標記。Phos-tag^™ SDS-PAGE這種電泳方法可以同時分析磷酸化蛋白異構(gòu)體和配對二價錳的非磷酸化蛋白，是一種使用Pho-tag^™瓊脂糖用于分離，純化和富集磷酸化蛋白質(zhì)的全新方法。 這種方法的基礎(chǔ)是金屬固化親和層析(IMAC)，使用磷酸結(jié)合標記分子（雙核鋅(II)絡(luò)合物），該標記分子接在高度交聯(lián)的瓊脂糖上（Phos-tag瓊脂糖）。

Phos-tag^™磷酸化親和電泳原理

Phos-tag Agarose特點：

■ 在1小時內(nèi)純化磷酸化蛋白
■ 所有操作在生理條件下（pH7.5）
■ Phos-tag 瓊脂糖操作過程與常規(guī)親和純化層析相類似
■ 無需還原劑和表面活性劑

Phos-tag ™應(yīng)用：在A431裂解液中的磷酸化蛋白的純化

M：分子量標記 Lane 1：未吸附層 Lane 2：吸附層 Lane 3：柱清洗層 把Phos-tag™填充到柱里，再加上A431 裂解液。 SYPRO Ruby染色（左圖）再使用Anti-p Tyr抗體進行免疫印跡（右圖），檢測出結(jié)果。 結(jié)果確認磷酸化蛋白濃縮在柱吸附層里。

Phos-tag ™Agarose 使用注意事項：

1. 當Phos-tag™ 瓊脂糖凝膠床按使用規(guī)范固定在1毫升時，很容易根據(jù)樣品的量來優(yōu)化。
在測定緩沖液pH值之前，使用2中不同pH值的緩沖溶液（例如 pH 4和7）對電極進行校正

2. 當大量的裂解液蛋白（例如0.60 mg A431 細胞蛋白，在0.25 mL RIPA緩沖液中)用在1-mL凝膠床, 一部分蛋白會在通過和洗滌時被洗脫出來。使用2倍體積的RIAP緩沖液(例如 0.50 mL, 0.50 mg 裂解液蛋白)和1-mL 凝膠床時會產(chǎn)生一個峰, 可以歸因于由EDTA消除HOVO32- 或zinc(II)-所產(chǎn)生的競爭結(jié)合。

3. 部分蛋白在離心過濾時被吸附。請使用蛋白質(zhì)定量方法（例如Bradford法）估計洗脫出的蛋白質(zhì)回收率。

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上述產(chǎn)品在2-10°C下保存

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