紅細(xì)胞裂解液配制方法，操作步驟，使用方法及其他咨訊由上海古朵生物提供講述，本司現(xiàn)貨供應(yīng)ELISA試劑盒，動(dòng)物血清，標(biāo)準(zhǔn)品，對照品，培養(yǎng)基，抗體，抗原，染色液，溶液，緩沖液，裂解液，生化試劑，化學(xué)試劑，生物分子，微生物，實(shí)驗(yàn)耗材，其他試劑等，品種齊全，價(jià)格實(shí)惠，歡迎訂購!
?紅細(xì)胞裂解液配制方法
【信息說明】
產(chǎn)品名稱：紅細(xì)胞裂解液
供應(yīng)商：古朵生化試劑廠家
規(guī)格：100ml/500ml
分類：細(xì)胞組分分離
儲(chǔ)存條件：4℃,12個(gè)月
用途：去除細(xì)胞懸液中的紅細(xì)胞,屬于溶解紅細(xì)胞方法的一種
注意事項(xiàng)：無菌溶液。注意無菌操作,經(jīng)過濾除菌處理。
【簡介說明】
紅細(xì)胞裂解液是一種用于從人或鼠等的血液或組織樣品中裂解并去除無細(xì)胞核紅細(xì)胞的溶液。在裂解紅細(xì)胞的同時(shí)幾乎不損傷淋巴細(xì)胞或其它有細(xì)胞核的細(xì)胞。本裂解液不適用于有細(xì)胞核紅細(xì)胞的裂解，例如鳥或禽類的紅細(xì)胞。
本裂解液經(jīng)過無菌處理，處理過的血液或組織細(xì)胞樣品可以用于后續(xù)的原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測。
【操作步驟】
1、新鮮組織經(jīng)過膠原酶或*等消化處理，通過適當(dāng)方法分散成細(xì)胞懸液，離心棄上清。
2、對于0.2mL細(xì)胞沉淀加入1mL紅細(xì)胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解4~5min。
3、加入15~20mL PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，混勻。
4、1000g離心5min，棄紅色上清。
5、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的一些檢測。
6、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
說明：對于常規(guī)步驟，多一步洗滌過程中的離心，但可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好一些，同時(shí)不需要大體積的離心管?？焖俨襟E少了一次離心，但洗滌效果略差一些，同時(shí)需要大體積的離心管。
【配制方法】
1、試劑配制
原液1號：10 g葡萄糖+0.6 g磷酸二氫鉀+3.58 g*(7H2O)+20 ml 5 g/L酚紅溶液，加雙蒸水定容至1 000 ml。
原液2號：1.86 g氯化鈣(2H2O)+4.0 g氯化鉀+80 g氯化鈉+1.04 g氯化鎂+2.0 g*(7H2O)，加雙蒸水定容至1 000 ml。
應(yīng)用液有3種，1#：10 ml原液1號+10 ml原液2號，加雙蒸水定容至100 ml。
2#：20 ml原液1號+20 ml原液2號，加雙蒸水定容至100 ml。
3#：1 ml原液1號+1 ml原液2號，加雙蒸水定容至100 ml。
2、紅細(xì)胞裂解
取100 μl抗凝全血，加2 ml應(yīng)用液3#，混勻15～20 s;加2 ml應(yīng)用液2#，混勻15～20 s;加4 ml應(yīng)用液1#，混勻15～20 s;300×g離心2 min，棄上清;收集沉淀，加PBS緩沖液，制成白細(xì)胞懸液，備用。
(這種紅細(xì)胞裂解法滿足了白細(xì)胞流式細(xì)胞儀檢測分選要求，價(jià)格低廉，是一種簡便快捷、經(jīng)濟(jì)實(shí)用的白細(xì)胞純化分選方法。
3、紅細(xì)胞裂解液(0.01mol/L Tris-HCL pH7.6; 0.01mol/L NaCl; 0.005mol/L MgCl2)
4、紅細(xì)胞裂解液(139.6 mmol/L NH4Cl, 16.96 mmol/L Tris, 用1 mol/L HCl調(diào) pH至7.2)
5、紅細(xì)胞裂解液的制備：碳酸氫鉀(KHCO3)1.0g;氯化氨(NH4CL)8.3g;EDTA-Na2 0.037g，加雙蒸水至1000ml，即工作液。
【使用方法】
一、組織細(xì)胞樣品：
1、新鮮組織經(jīng)*或膠原酶等消化分散成單個(gè)細(xì)胞懸液，離心棄去上清液;
2、從4℃冰箱中取出ELS裂解液，按1:3-5的比例向細(xì)胞沉淀中加入ELS裂解液(1ml細(xì)胞壓積加入3-5ml裂解液)，輕輕吹打混勻;
3、800-1000rpm離心5-8分鐘，離心棄去上層紅色清液;
4、收集沉淀部分，加入Hank’s液或無血清培養(yǎng)液離心洗2-3次;
5、如裂解不*可重復(fù)步驟2和3;
6、重懸細(xì)胞，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn);如提取RNA，是于步驟4開始使用DEPC水配制的溶液中進(jìn)行。
二、血細(xì)胞：
1、新鮮抗凝血，離心棄去上清液;
2、取出4℃冰箱預(yù)冷的ELS裂解液，按1:6-10的比例向細(xì)胞沉淀中加入ELS裂解液(1ml細(xì)胞壓積加入6-10ml裂解液)，輕輕吹打混勻;
3、800-1000rpm離心5-8分鐘，離心棄去上層紅色清液;
4、收集沉淀部分，加入Hank’s液或無血清培養(yǎng)液離心洗2-3次;
5、如裂解不*可重復(fù)步驟2和3;
6、重懸細(xì)胞，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn);如提取RNA，是于步驟4開始使用DEPC水配制的溶液進(jìn)行。
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