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雞腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA檢測(cè)試劑盒

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  • 公司名稱 上海古朵生物科技有限公司
  • 品牌
  • 型號(hào)
  • 所在地 上海
  • 廠商性質(zhì) 代理商
  • 更新時(shí)間 2018/6/19 9:08:45
  • 訪問(wèn)次數(shù) 250

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<strong><strong>雞腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA檢測(cè)試劑盒</strong></strong>說(shuō)明書(shū)

雞腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

 

  【信息說(shuō)明

  中文名:雞腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒

  別名:雞腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA Kit

  供應(yīng)商:上海古朵

  規(guī)格:48t/96t

  保存:2-8℃

  保質(zhì)期:6個(gè)月

  用途:主要用于科研方面,不用于臨床診斷??梢杂糜跈z測(cè)各種指標(biāo)。

  試劑盒成分:酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準(zhǔn)品等。

  種屬:人、大小鼠、豚鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、植物等。

 

  【組成說(shuō)明

  1、450±10nm濾光片的酶標(biāo)儀(建議儀器使用前提前預(yù)熱)

  2、單道或多道微量加液器及吸頭

  3、稀釋樣品的EP管

  4、蒸餾水或去離子水

  5、吸水紙

  6、盛放洗液的容器

 

  【樣本要求

  1、血清:

  室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

  2、血漿:

  應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成應(yīng)再次離心。

  3、尿液:

  用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

  4、細(xì)胞培養(yǎng)上清:

  檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。

  5、培養(yǎng)細(xì)胞:

  檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

  6、組織標(biāo)本:

  切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。

  7、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

  8、不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

 

  【操作步驟

  1、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,依次進(jìn)行稀釋數(shù)倍。

  2、加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

  3、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

  4、配液:將30倍(48T 的20 倍)濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

  5、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

  6、加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

  7、溫育:操作同3。

  8、洗滌:操作同5。

  9、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

  10、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

  11、測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

 

  【注意事項(xiàng)

  1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

  2、濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

  3、各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,*使用排槍加樣。

  4、請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔一孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

  5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

  6、底物請(qǐng)避光保存。

  7、嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

  8、所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

  9、本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

 

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