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人總前列腺特異抗原(tPSA)ELISA試劑盒

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  【信息說明

  中文名:人總前列腺特異抗原(tPSA)ELISA試劑盒

  中文別名:人總前列腺特異抗原(tPSA)ELISA Kit

  供應(yīng)商:上海古朵

  規(guī)格:48t/96t

  保存:2~8℃

  有效期:6個月

  種屬:人ELISA試劑盒

  適用范圍:僅供科研

  保存及有效期:2-8℃,六個月,-20℃一年

  檢測目的:用于測定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本;例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本。

 

  【特點說明

  專一性強:抗原與抗體的免疫反應(yīng)是專一反應(yīng),而免疫酶技術(shù)以免疫反應(yīng)為基礎(chǔ),所檢測的對象是抗原(或抗體),使用的抗體除標(biāo)記了酶以外,與普通抗體的免疫反應(yīng)特性并無多大差別。

  靈敏度高:由于抗體聯(lián)結(jié)上了酶,因此,借助于酶與底物的顯色反應(yīng),顯示抗原與抗體的結(jié)合,大大提高了檢測的靈敏性,使檢測水平接近放射免疫測定法。

  樣品易保存:經(jīng)過酶反應(yīng)顯示的有色產(chǎn)物大多比較穩(wěn)定,因此有利于樣品的保存。

 

  【組成說明

  1、已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑)

  2、C的抗原或抗體(結(jié)合物)

  3、酶的底物

  4、陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測定中)

  5、結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液

  6、洗滌液,在板式ELISA中,常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水

  7、酶反應(yīng)終止液,常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸,其濃度按加量及比色液的終體積而異,在板式ELISA中一般采用2mol/L

  8、人總前列腺特異抗原(tPSA)ELISA試劑盒說明書

 

  【樣本處理

  包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。

  1、血清:

  室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

  2、血漿:

  應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

  3、尿液:

  用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

  4、細胞培養(yǎng)上清:

  檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/ 分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞破壞并 放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

  5、組織標(biāo)本:

  切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

 

  【操作步驟

  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,依次進行稀釋數(shù)倍。

  加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

  溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

  配液:將30倍(48T 的20 倍)濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

  加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

  溫育:操作同3。

  洗滌:操作同5。

  顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘。

  終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

  測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

 

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