類胰島素生長因子結(jié)合蛋白3測定試劑盒（酶聯(lián)免疫吸附法）
ELISA操作加樣過程常見問題及解答
1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進行加樣；
- 其他樣本的處理不當(dāng)，導(dǎo)致加樣不準(zhǔn)；
- 加樣時，不同標(biāo)準(zhǔn)品或樣本不更換槍頭；
4）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是室內(nèi)溫度較高時）；
5）加樣尤其是加底物液和終止液時，順序不*，導(dǎo)致樣本顯色時間不*。
解決辦法：
1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放 1-2 小時后，再用 3000rmp 離心 15 分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒*混合 5-10 次，放置一段時間后，3000rpm 離心 15 分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在 2-8℃ 冰箱中，若要貯存，則置于-20℃ 的低溫冰箱內(nèi)。
2） 若樣本不是常規(guī)樣本，應(yīng)按照不同樣本的處理方法先行處理樣本，終使用清澈的樣本進行檢測；（詳見我公司常用樣本處理技術(shù)文章）
3）加樣時，不同的標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品和樣本分別使用不同的槍頭，避免交叉污染
加樣后及時放入孵箱；標(biāo)本較多時，請分批操作；
5） 加酶或底物液，終止液時按照前后*的順序加樣，保證每個樣本反應(yīng)的時間*。為了縮短反應(yīng)時間，可采用多道移液器進行。
通用名稱：類胰島素生長因子結(jié)合蛋白3測定試劑盒（酶聯(lián)免疫吸附法）
英文名稱：IGFBP-3 ELISA
公司品牌：德國DRG
產(chǎn)品貨號：EIA5409
產(chǎn)品規(guī)格：96T
檢測樣本：血清
儲存條件：2-8℃
檢測方法：ELISA
預(yù)期用途：用于體外定量測定人血清中胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-3的含量
供應(yīng)商家：深圳市科潤達生物工程有限公司
類胰島素生長因子結(jié)合蛋白3ELISA試劑盒產(chǎn)品規(guī)格
96T
類胰島素生長因子結(jié)合蛋白3ELISA試劑盒預(yù)期用途
IGFBP-3 試劑盒用于體外定量測定人血清中胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-3（IGFBP-3）的含量。
IGFBP-3 前言簡介
胰島素樣生長因子（IGF）系統(tǒng)是正常體內(nèi)生長和再生的主要調(diào)節(jié)因子，影響細胞增殖，分化和細胞凋亡。 此外，IGF-系統(tǒng)似乎改變胰島素敏感性和*性葡萄糖代謝。 后，許多流行病學(xué)，實驗和臨床資料表明，IGF-系統(tǒng)也涉及幾種常見癌癥的發(fā)展以及常見疾病如動脈粥樣硬化和2型糖尿病等。
IGF家族由一系列密切相關(guān)的多肽組成，其包括兩個主要促進生長的多肽，IGF-I和IGF-II，6種特異性高親和力IGF結(jié)合蛋白（IGFBP-1至-6）和一個大的非IGF結(jié)合糖蛋白，“酸不穩(wěn)定亞單位”（ALS）。
IGFBP-3是較豐富的IGF結(jié)合蛋白，占健康人循環(huán)IGF結(jié)合能力的75％以上。 IGFBP-3與IGFBP-5共享功能特性，因為兩種肽都能與ALS和IGF-I或-II的形成高分子量約150千道爾頓的三元復(fù)合物。 然而，IGFBP-5循環(huán)濃度比IGFBP-3低得多，而在健康受試者中，三元復(fù)合物攜帶多達90％的IGFBP-3但只有約50％的IGFBP-5。
初IGFBP被認為是IGF-載體蛋白，穩(wěn)定血漿IGF水平并控制IGF從循環(huán)中流出至血管外隔室。此外，人們認為 IGFBP復(fù)合IGF在生物學(xué)上或多或少無活性，被剝奪了與IGF-1受體相互作用的能力。但是，很快人們就發(fā)現(xiàn)，在一些實驗設(shè)置中，IGFBP激活而不是抑制IGF-I介導(dǎo)的作用，因此，IGFBP通常被稱為IGF-1生物活性的調(diào)節(jié)劑。另外，大多數(shù)的IGFBP，特別是IGFBP-3，發(fā)揮著IGF-I和IGF-I受體的獨立作用，可能涉及位于細胞表面和細胞內(nèi)的特定受體間的相互作用。例如，IGFBP-3現(xiàn)在被認為是作為抗癌分子服務(wù)的，它可以明顯防止幾種常見的癌癥，同時IGFBP-3在培養(yǎng)的脂肪細胞中對胰島素信號的傳導(dǎo)作用也被提出。
三元復(fù)合物的轉(zhuǎn)換非常緩慢，一天中IGFBP-3的血漿濃度始終保持穩(wěn)定，而不受短期營養(yǎng)變化的影響。 因此，IGFBP-3的水平可以由一個單獨測 量確定。 GH是IGFBP-3以及IGF-I和ALS的主要調(diào)節(jié)因子，因此，三種多肽水平在青春期生*間增加，其后隨著年齡的增長逐漸下降。 在兒童中，IGFBP-3已顯示與24小時GH分泌相關(guān)，因此，IGFBP-3可能對兒童GH缺陷的診斷有幫助。
IGFBP-3 試劑盒檢測原理
GFBP3-ELISA是固相酶擴增敏感性對微孔板進行的免疫測定。標(biāo)準(zhǔn)品和樣品與包被的捕獲單克隆抗體（MAb 1）和用辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的單克隆抗體（MAb 2）反應(yīng)。經(jīng)過孵育形成一個三明治結(jié)構(gòu)：包被的MAb 1 - -人IGFBP3--MAb 2-HRP，洗滌微孔板以除去未結(jié)合的酶標(biāo)記抗體。通過顯色測量結(jié)合的酶標(biāo)記抗體反應(yīng)。加入顯色溶液（TMB）并孵育。添加終止液終止反應(yīng)，然后在適當(dāng)波長下讀取微孔板。被測物含量的顯色程度與人IGFBP3濃度成正比。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣品中IGFBP3濃度通過標(biāo)準(zhǔn)曲線可直接讀取。
IGFBP-3 試劑盒組成成分
| | 成分 | 規(guī)格（96T） | 狀態(tài) |
PLATE | 96孔微量滴定板，包被了IGFBP3（單克隆抗體） | 96孔 | 即用型 |
AbHRP CONC | 酶標(biāo)記物濃縮液：HRP標(biāo)記的抗IGFBP3（單抗），含procin和牛血清白蛋白的檸檬酸緩沖液 | 0.5ml*1瓶 | 用酶標(biāo)記物緩沖液20倍稀釋 |
CONJ BUF | 酶標(biāo)記物緩沖液：含有牛血清白蛋白和百里酚的tris緩沖液 | 10ml*1瓶 | 即用型 |
CAL N | 標(biāo)準(zhǔn)品-N=1-5，含牛血清和百里酚的磷酸鹽緩沖液。
瓶體標(biāo)簽上有具體濃度。
標(biāo)準(zhǔn)品都是預(yù)稀釋過的，用稀釋液做0標(biāo)準(zhǔn)品。 | 5瓶凍干粉 | 加入1ml蒸餾水 |
DIL BUF | 稀釋液：含有牛血清，牛白蛋白和百里酚的磷酸鹽緩沖液 | 100ml*1瓶 | 即用型 |
ConTROL N | 質(zhì)控品N=1或2 ，含有人血清和百里酚，質(zhì)控品是預(yù)稀釋過的 | 2瓶凍干粉 | 加入1ml蒸餾水 |
WASH SOLN
CONC | 洗滌液（tris-HCL） | 10ml*1瓶 | 蒸餾水200倍稀
釋（使用電磁攪拌器） |
CHROM TMB | 底物液：TMB | 12ml*1瓶 | 即用型 |
| STOP SOLN | 終止液：1.0N鹽酸 | 12ml*1瓶 | 即用型 |
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