單增李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基
（L. mono Differential HiVegTM Agar Base）
貨號(hào) | 產(chǎn)品 | 原裝品名 | 規(guī)格 | 貨期 | 儲(chǔ)存 | 效期 |
MV1540 | 單增李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基（ALOA法） | L. mono Differential HiVegTM Agar Base | 100g(1.3L) 500g（6.9L） | 4-6周 | 2-8°C | 詳見產(chǎn)品包裝 |
FD214-5VL | 添加劑1 | L. mono Enrichment Supplement I | 5管(2.5L) | 4-6周 | -20°C | 詳見產(chǎn)品包裝 |
FD212-5VL | 添加劑2 | L. mono Selective Supplement I | 5管(2.5L) | 4-6周 | 2-8°C | 詳見產(chǎn)品包裝 |
FD213-5VL | 添加劑3 | L. mono Selective Supplement II | 5管(2.5L) | 4-6周 | 2-8°C | 詳見產(chǎn)品包裝 |
應(yīng)用
用于選擇性分離鑒別單核細(xì)胞增生李斯特氏菌。
背景
單核細(xì)胞增生李斯特氏菌是一種革蘭氏陽性食源性人類病原體，使孕婦嚴(yán)重感染并終可能導(dǎo)致流產(chǎn)、死胎、新生兒李斯特氏菌病和腦膜炎或成人和青少年原發(fā)性菌血癥。伊氏李斯特氏菌對(duì)人類的致病性不確定(1)。由于單核細(xì)胞增生李斯特氏菌和英諾克李斯特氏菌具有相似的生化特性，傳統(tǒng)培養(yǎng)基（PALCAM培養(yǎng)基）不能區(qū)分。
原理
Ottoviani 和 Agosti (1,2)開發(fā)了單核細(xì)胞增生李斯特氏菌鑒別基礎(chǔ)培養(yǎng)基，用于從食物和動(dòng)物飼料中選擇性分離鑒別單核細(xì)胞增生李斯特氏菌。這款李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基在該培養(yǎng)基配方上略作改良。它在制備時(shí)用無瘋牛病風(fēng)險(xiǎn)的植物蛋白胨取代了動(dòng)物蛋白胨。
該培養(yǎng)基中的HiVeg蛋白胨1號(hào)、（HiVeg）水解物、酵母粉和丙酮酸鈉提供了細(xì)菌生長所必需的營養(yǎng)和氮源物質(zhì)。葡萄糖是可發(fā)酵的碳水化合物。氯化鈉維持滲透壓平衡。磷酸鹽是緩沖液成分。氯化鋰和選擇性添加劑（FD212和FD213）抑制伴隨的菌群生長，而允許李斯特氏菌生長。李斯特氏菌水解顯色底物，產(chǎn)生綠色菌落。從其它李斯特氏菌中鑒別出單核細(xì)胞增生李斯特氏菌，是依據(jù)其*的磷脂酰肌醇特異性磷脂酶C （PIPLC）活性。磷脂酶C水解培養(yǎng)基中的底物添加劑（貨號(hào)FD214）導(dǎo)致單核細(xì)胞增生李斯特氏菌菌落周圍產(chǎn)生不透明的暈環(huán)。
培養(yǎng)基組分
成份 | 克/升 |
HiVeg蛋白胨1號(hào) | 18.000 |
（HiVeg）水解物 | 6.000 |
酵母粉 | 10,000 |
丙酮酸鈉 | 2.000 |
葡萄糖 | 2.000 |
甘油磷酸鎂 | 1.000 |
* | 0.500 |
氯化鈉 | 5.000 |
氯化鋰 | 10.000 |
無水* | 2.500 |
顯色底物 | 0.050 |
瓊脂 | 15.000 |
終pH（25℃）7.2±0.2
配置
36.02g干粉溶于 460ml蒸餾水。加熱沸騰使干粉*溶解。15磅（121℃）滅菌15分鐘。取李斯特氏菌增菌添加劑（貨號(hào)FD214）1管放置室溫融化。取李斯特氏菌選擇性添加劑I（貨號(hào)FD212）1管,添加10ml無菌蒸餾水復(fù)溶。取李斯特氏菌選擇性添加劑II（貨號(hào)FD213）1管，添加2ml 0.2N氫氧化鈉，再加3ml無菌蒸餾水復(fù)溶。待460ml培養(yǎng)基冷卻至45-50°C，無菌加入以上復(fù)溶的3種添加劑?；靹虿A注于無菌平皿中。
警告：氯化鋰是有害的。避免身體接觸和吸入蒸氣。一旦與皮膚接觸，應(yīng)用大量水沖洗。
質(zhì)量控制
外觀：奶油色至黃色均一自由流動(dòng)粉末。
成膠性：牢固，與1.5％瓊脂凝膠相當(dāng)。
成品顏色和透明度：淡琥珀色，不透明凝膠。
配比反應(yīng)：25℃時(shí)7.2%（7.2g/100ml蒸餾水）水溶液，pH: 7.2±0.2
pH值：7.00-7.40
培養(yǎng)反應(yīng)
培養(yǎng)基無菌加入3種添加劑（FD212,FD213,FD214）制備好后，接種下列菌種，35-37℃孵育24-48小時(shí)后觀察培養(yǎng)反應(yīng)。
有機(jī)體 | 接種（CFU） | 生長 | 回收率 | 菌落顏色 | PIPLC活性 |
白色念珠菌（ATCC 10231） | ≥103 | 抑制 | 0% | | |
糞腸球菌（ATCC 29212） | ≥103 | 抑制 | 0% | | |
大腸埃希氏菌（ATCC 25922） | ≥103 | 抑制 | 0% | | |
英諾克李斯特氏菌（ATCC 33090） | ≥103 | 旺盛 | ≥50% | 藍(lán)綠色 | （-） |
格雷氏李斯特氏菌（ATCC 19120） | 50-100 | 旺盛 | ≥50% | 藍(lán)綠色 | （-） |
伊氏李斯特菌（ATCC 19119） | 50-100 | 旺盛 | ≥50% | 藍(lán)綠色 | （+）菌落周圍有不透明暈環(huán) |
單核細(xì)胞增生李斯特氏菌（ATCC 19112） | 50-100 | 旺盛 | ≥50% | 藍(lán)綠色 | （+）菌落周圍有不透明暈環(huán) |
斯氏李斯特氏菌（ATCC 35967） | 50-100 | 旺盛 | ≥50% | 藍(lán)綠色 | （-） |
威爾斯李斯特氏菌（ATCC 43549） | 50-100 | 旺盛 | ≥50% | 藍(lán)綠色 | （-） |
銅綠假單胞菌（ATCC 27853） | ≥103 | 抑制 | 0% | | |
參考文獻(xiàn)
1.Ottaviani F., Ottaviani M., and Agosti M. (1997 a), Industrie Alimentari 36, 1-3.
2.Ottaviani F., Ottaviani M., and Agosti M. (1997 b), Quimper Froid Symposium Proceedings p. 6, A.D.R.I.A. Quimper,France, 16-18 June 1997.
產(chǎn)品引用文獻(xiàn)
1. H Momtaz，S Yadollahi. Molecular characterization of Listeria monocytogenes isolated from fresh seafood samples in Iran.Diagnostic Pathology, 2013,8(1):1-6
2. MM Yadav，A Roy，B Bhanderi，C Joshi.Pheno-genotypic characterization of Listeria monocytogenes from bovine clinical mastitis.Buffalo Bulletin,2010 , 29(1):29-38
3. Nitin Chandhrakant Dudhe,et al. InVitro Characterization of Listeria monocytogenes Isolates by Haemolysis, Camp, Piplc Assay with Protein Profiling and Antibiotic Resistance Recovered from Nagpur Region.Advances in Animal and Veterinary Sciences.2014,2(6): 321–328
4. Shole Yadollahi, Hassan Momtaz,Monir Doudi,Elahe Taj bakhsh. The objective of this study was to isolation and characterization of Listeria species and determines Listeria monocytogenes serotypes in fresh fish,shrimp, crab and lobster in Isfahan and Shahrekord, Iran.International journal of Advanced Biological and Biomedical Research.2013,1(5):493-504
5. Sanjita Sharma, Vishnu Sharma, Dinesh Kumar Dahiya, Aarif Khan, Manisha Mathur, Amit Sharma.Prevalence, Virulence Potential, and Antibiotic Susceptibility Profile of Listeria monocytogenes Isolated From Bovine Raw Milk Samples Obtained From Rajasthan, India.Foodborne Pathogens & Disease, 2017,14(3):132
