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.測定多肽,一般采用什么柱子?流動(dòng)相是乙腈和水,還有微量的TFA。特別是像類似三肽的短肽,應(yīng)該怎么選擇柱子?
答:分子量不高的多肽一般選用常規(guī)C18柱就能測定,也有用離子交換柱、水性C18柱和Hilic親水作用柱的。
5.氨基柱在進(jìn)酸性樣品時(shí),很傷柱子,如使用一段時(shí)間后,柱效降低,峰形改變,如何恢復(fù)?
答:氨基柱測酸性樣品,應(yīng)該是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能會(huì)使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化,導(dǎo)致使用一段時(shí)間后對(duì)于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。建議:用5~10倍的柱體積的含0.5~1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動(dòng)相洗去多余氨),之后,再進(jìn)行分析這類酸性分析物時(shí)建議在流動(dòng)相中略微添加少許氨如,0.1%。
6.色譜柱的技術(shù)都有哪些?比如,封尾等,這些技術(shù)在應(yīng)用時(shí)都體現(xiàn)在哪里?
答:色譜柱技術(shù)包括填料技術(shù)和裝柱技術(shù),填料技術(shù)自不待言,填料的好壞對(duì)色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響。裝柱技術(shù)也沒有想象中的這么簡單,不同固定相、不同粒徑、不同柱管內(nèi)徑和長度,裝柱工藝都有所不同,要裝出緊密、穩(wěn)定、均一的柱床,更多是一門藝術(shù),需要經(jīng)驗(yàn)積累。
國內(nèi)和國外想比,我認(rèn)為色譜柱的差距在于:國內(nèi)公司以前都不會(huì)自己開發(fā)填料,一般買國外現(xiàn)成填料裝柱,買到的填料質(zhì)量控制權(quán)不在自己手里。另外因?yàn)檠b柱歷史短,經(jīng)驗(yàn)積累少,裝柱工藝也沒有*達(dá)到國外水平。另外,對(duì)色譜柱性能很關(guān)鍵的基礎(chǔ)材料——裸硅膠,國產(chǎn)的還不過關(guān),在純度、粒徑和孔徑的均一性方面和國外產(chǎn)品相比,差距很大。
7.色譜柱技術(shù)的差距在哪里?
答:色譜柱技術(shù)包括填料技術(shù)和裝柱技術(shù),填料技術(shù)自不待言,填料的好壞對(duì)色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響。裝柱技術(shù)也沒有想象中的這么簡單,不同固定相、不同粒徑、不同柱管內(nèi)徑和長度,裝柱工藝都有所不同,要裝出緊密、穩(wěn)定、均一的柱床,更多是一門藝術(shù),需要經(jīng)驗(yàn)積累。
國內(nèi)和國外想比,我認(rèn)為色譜柱的差距在于:國內(nèi)公司以前都不會(huì)自己開發(fā)填料,一般買國外現(xiàn)成填料裝柱,買到的填料質(zhì)量控制權(quán)不在自己手里。另外,因?yàn)?,裝柱歷史短,經(jīng)驗(yàn)積累少,裝柱工藝也沒有*達(dá)到國外水平。另外,對(duì)色譜柱性能很關(guān)鍵的基礎(chǔ)材料——裸硅膠,國產(chǎn)的還不過關(guān),在純度、粒徑和孔徑的均一性方面和國外產(chǎn)品相比,差距很大。
8.柱子在什么情況下可以清洗一下篩板呢?原來也討論過這個(gè)問題,我也拆下來清洗過,但我看到柱前段的污染更甚,于是就用刀片刮了刮,然后把清洗好的篩板安裝上去。問題解決了,但使用壽命會(huì)不會(huì)減少呢?
答:柱頭污染了,就取出污染的,再裝一些填料。因?yàn)?,加入你刮了些填料,那么微觀的塔板數(shù)就少了。假入你刮得不多,僅表面,可能就是一些臟物,所以,問題解決,但是,今后還會(huì)有同樣問題,再掛,那么不小心刮,影響柱效。建議還是裝一個(gè)預(yù)柱。
9.如果柱子取下來放置一段時(shí)間,需要做什么保護(hù)嗎?
答:對(duì)一般的反相柱,也就是洗干凈后放到純甲醇(乙腈)或者是80%左右的甲醇(乙腈)水中,然后用堵頭塞緊柱兩頭,以免保存溶劑揮發(fā),應(yīng)該不需要做特殊的保護(hù)。
10.流動(dòng)相中加入適量的si氫fu喃可以改善峰形的機(jī)理是什么?
答:《高效液相色譜方法及應(yīng)用》于世林編著的上面說:甲醇為質(zhì)子給予體、乙腈為質(zhì)子接受體、si氫fu喃是偶極溶劑,應(yīng)該除了極性影響,還有另外的影響因素,至于分離機(jī)理,還是比較復(fù)雜的,不能看成是個(gè)萬能方法。
11.關(guān)于色譜柱的填裝問題!我個(gè)人認(rèn)為現(xiàn)在色譜柱的填裝一般有3種情況:
①國外生產(chǎn)填料并填裝完成成品賣到國內(nèi);
②國外生產(chǎn)填料,國內(nèi)填裝銷售;
③國內(nèi)生產(chǎn)填料,國內(nèi)填裝銷售。
一般情況下,第1種情況賣的貴,也質(zhì)量!可是我就不明白了:如果是填料的生產(chǎn)很復(fù)雜的話,那么填裝上國內(nèi)也跟不上去嗎?為什么換在國內(nèi)填裝就會(huì)出現(xiàn)或多或少的一些小問題呢?
答:國內(nèi)填裝會(huì)出現(xiàn)質(zhì)量小問題,和國內(nèi)目前普遍做事沒有國外嚴(yán)謹(jǐn)有關(guān)吧。如果工藝技術(shù)上沒有問題,又能制訂并切實(shí)執(zhí)行一整套嚴(yán)格的生產(chǎn)質(zhì)量管理措施,國內(nèi)填裝和國外填裝并無區(qū)別。