*（酶聯(lián)免疫法）
elisa操作洗板過(guò)程常見問(wèn)題及解答
1） 采用手工洗板， 孔與孔之間液體交叉。
2） 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。
3） 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。
解決辦法：
1） 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后*在吸水紙（選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；
2） 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
手工洗板，每次加液后浸泡30s左右，保證洗板的效果。
通用名稱：*（酶聯(lián)免疫法）
英文名稱：Progesterone ELISA
產(chǎn)品貨號(hào)：RE52231
產(chǎn)品規(guī)格：96T
檢測(cè)樣本：血清和血漿
公司品牌：德國(guó)IBL
儲(chǔ)存條件：2-8℃
檢測(cè)方法：ELISA方法
預(yù)期用途：可用于人血清和血漿中孕酮的定量檢測(cè)
參考價(jià)格：詢價(jià)
供應(yīng)商家：深圳市科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司
孕酮ELISA檢測(cè)試劑盒預(yù)期用途
*可用于血清和血漿中孕酮的定量檢測(cè)。
孕酮簡(jiǎn)介
孕酮是一種類固醇激素，含21個(gè)碳原子，在C-3上連有酮基，在C-4與在C-5之間為雙鍵連接。該類固醇激素是一種女性性激素，與雌激素共同在月經(jīng)周期中調(diào)節(jié)附屬的器官，它對(duì)于胚細(xì)胞著床前的子宮內(nèi)膜增生狀態(tài)和維持孕期是特別重要的。在非孕期婦女懷孕的胎盤成為主要來(lái)源。極少數(shù)來(lái)源于兩性的腎上腺皮質(zhì)。孕酮在循環(huán)血中主要與皮質(zhì)類固醇結(jié)合蛋白(CBG)，性激素結(jié)合蛋白(SHBG)和白蛋白結(jié)合，僅有循環(huán)總濃度的2-10%是游離激素。根據(jù)月經(jīng)循環(huán)周期血孕酮濃度范圍很寬，在卵泡期可以低于1ng/ml(3。2nmol/L)，在黃體期達(dá)到10-20ng/ml(32-64nmol/L)。在排卵后4-7天達(dá)到蕞高水平保持4-6天，在月經(jīng)開始前24小時(shí)降至排卵前的水平，因?yàn)樵型纳吆徒档团c卵巢卵泡和黃體的活動(dòng)相對(duì)應(yīng)，因此血漿孕酮的測(cè)定在臨床上常用來(lái)證明排卵和非孕婦女的黃體功能正常。假如排卵沒(méi)有發(fā)生，黃體則沒(méi)有生成進(jìn)而孕酮升高的循環(huán)也不能見到，異常的孕酮分泌與經(jīng)前期緊張子宮內(nèi)膜異位癥痛經(jīng)和黃體不全有關(guān)。孕酮濃度不僅個(gè)體之間有差異，而且同一個(gè)人每天甚至每個(gè)小時(shí)都會(huì)不同，一般的在婦科內(nèi)分泌紊亂或異常妊娠為了恰當(dāng)?shù)慕忉尣∫蜻B續(xù)測(cè)定比單個(gè)測(cè)定更有意義。在孕期孕通更多的有胎盤產(chǎn)生，血漿水平在這個(gè)時(shí)期穩(wěn)定在200ng/ml的水平。
實(shí)驗(yàn)輔助所需材料（試劑盒不提供）
●酶標(biāo)儀
●校準(zhǔn)的移液器
●吸水紙
●去離子水
孕酮ELISA檢測(cè)試劑盒儲(chǔ)存條件
*可在2-8℃下保存至有效期，不要使用過(guò)期的試劑，開封的試劑和微孔板都應(yīng)貯存在2-8℃，微孔板密封袋一旦打開，必須立即重新密封保存，開封的試劑按上述貯存方法可保存2個(gè)月。
*檢測(cè)原理
*采用的是競(jìng)爭(zhēng)酶免法，樣品中未知量的抗原和一定量的酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合包被在包被孔中的抗體結(jié)合位點(diǎn)。溫育后洗板以終止競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)，樣本中孕酮的量與結(jié)合酶聯(lián)物的量成反比，加入底物液后，溶液所顯示的顏色強(qiáng)度與樣品抗原的量成反比。
*組成成分
●1×12×8——MTP——微孔板，微孔中包被了抗孕酮抗體（多抗）
●7×1ml——CAL A-G——標(biāo)準(zhǔn)品A-G，0; 0.3; 1.25; 2.5; 5; 15; 40ng/ml即用，0.03%Proclin300+0.005%硫酸*作為防腐劑
●1×25ml——ENZCONJ CONC——酶聯(lián)物，即用，HRP標(biāo)記的孕酮含0.03%Proclin300，0.015%BND，0.01%MIT作為防腐劑
●1×25ml——TMB SUBS——底物液，即用，內(nèi)含TMB
●1×14ml——TMB STOP——終止液，即用，0.5M的H2SO4
●1×30ml——WASHBUF CONC——洗滌液，40倍濃縮
*檢測(cè)步驟
注意：洗板步驟是否規(guī)范直接影響著試驗(yàn)的靈敏度和精確度
●將實(shí)驗(yàn)所需板條固定在板架上
●加25ul的標(biāo)準(zhǔn)品和樣本于相應(yīng)孔內(nèi)
●室溫下溫育5分鐘
●每孔加200ul的酶聯(lián)物，充分混合10秒，這一步驟中的充分混勻很重要
●室溫下溫育60分鐘
●棄去孔內(nèi)反應(yīng)液，每孔加400ul的洗滌液洗板3次，吸水紙上拍干
●每孔加200ul的底物液
●室溫下溫育15分鐘
●每孔加100ul的終止液
●加終止液10分鐘內(nèi)，酶標(biāo)儀上讀數(shù)
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