人TNF-β檢測試劑盒（ELISA）
ELISA操作終止及讀板過程常見問題及解答
- 終止液加樣時產(chǎn)生氣泡；
- 終止不均勻
- 酶標(biāo)板板底臟污
- 讀數(shù)波長錯誤，
- 終止液加入后，長時間不讀板
解決辦法：
- 加終止液時，應(yīng)避免起泡，以免造成假陽性
- 終止液加入后應(yīng)輕輕振板，使終止液與板孔內(nèi)溶液充分混勻；
- 酶標(biāo)板讀數(shù)前，應(yīng)輕輕拭去板底的水跡和污物，保證板底干潔，以免影響讀數(shù)；
- 應(yīng)根據(jù)底物液選擇合適的讀數(shù)波長，如TMB一般選擇450nm波長，PNPP一般選擇405nm波長等；
加入終止液后，應(yīng)盡快讀板，酶標(biāo)板內(nèi)顏色會隨著終止時間的延長而變淡，因此，*是在終止后10分鐘內(nèi)讀板。
通用名稱：人TNF-β檢測試劑盒（ELISA法）
英文名稱：RayBio® Human TNF-alphβ ELISA Kit
產(chǎn)品貨號：TNF-b
產(chǎn)品規(guī)格：96T
檢測樣本：血清、血漿、細胞上清液
公司品牌：美國RayBio
儲存條件：-20℃
檢測方法：ELISA方法
預(yù)期用途：定量測定人血清血漿和細胞培養(yǎng)上清液中的TNF-β的含量。
參考價格：詢價
供應(yīng)商家：深圳市科潤達生物工程有限公司
TNF-βELISA檢測試劑盒預(yù)期用途
RayBio®人TNF-βELISA試劑盒采用體外酶聯(lián)免疫吸附測定法，定量測定人血清（正常血清和血漿中的人TNF-β濃度低，在該測定中可能無法檢測到），血漿和細胞培養(yǎng)上清液中的TNF-β的含量。
TNF-βELISA檢測試劑盒組成成分
●TNF-β酶標(biāo)板（項目A）——12*8=96孔，包被有抗人TNF-β抗體——4℃ 1個月
●濃縮洗滌液（20x）（項目B）——20x濃縮溶液 25ml——4℃ 1個月
●標(biāo)準(zhǔn)蛋白（項目C）——2瓶人類TNF-β。1個小瓶就夠配制每個一式兩份的標(biāo)準(zhǔn)品。—— -80℃1個月
●檢測抗體TNF-β（項目F）——2瓶*化的抗人TNF-α。
●每個小瓶足以測定微板的一半。——4℃ 5天
●濃縮HRP-鏈霉親和素（項目G）——200μl 700X濃縮HRP綴合鏈霉親和素——不能保存和重新使用
●一步法TMB底物（項目H）——TMB溶液12ml——N/A
●終止液（項目I）——8ml 0.2M硫酸——N/A
●測定稀釋劑A（項目D）——30ml稀釋緩沖液，0.09％疊氮化吶防腐劑。——N/A
●測定稀釋劑B（項目E）——15ml 5X濃縮液——4℃ 1個月
●將未使用的板條重新裝回到含有干燥劑包的袋中，沿著整個邊緣重新密封。
人TNF-β檢測所需材料（試劑盒內(nèi)不提供）
●能夠測量450 nm處吸光度的酶標(biāo)儀。
●提供2μl至1 ml體積的精密移液管。
●可調(diào)1-25毫升移液器用于試劑制備。
●100毫升和1升刻度量筒。
●吸水紙。
●蒸餾水或去離子水。
●雙對數(shù)做圖紙或計算機和軟件進行ELISA數(shù)據(jù)分析。
●準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品或樣品稀釋液的管子。
人TNF-β檢測試劑盒檢測原理
人TNF-β檢測試劑盒使用包被有人TNF-β特異性抗體的96孔酶標(biāo)板，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品被加入到孔中，樣品中存在的TNF-β通過固相的抗體與孔結(jié)合。洗滌后加入*化的抗人TNF-β抗體。 洗去未結(jié)合的*化抗體后，將HRP-標(biāo)記的*加入到到孔中。 再次洗滌板孔，向孔中加入TMB底物溶液，底物顯色與所結(jié)合的TNF-β量成比例。 加入終止液顏色從藍色變?yōu)辄S色，并且在450nm處測量顏色的吸光度值。
人TNF-β檢測試劑盒存儲
人TNF-β檢測試劑盒可在-20°C下保存，從裝運之日起存放可長達1年。 避免反復(fù)凍融循環(huán)。 試劑盒可以在4℃下儲存長達6個月。 對于更長時間儲存時，建議儲存在-80°C。
人TNF-β檢測試劑盒檢測步驟
●使用前將所有試劑和樣品置于室溫（18 - 25ºC）。建議所有標(biāo)準(zhǔn)和樣品至少重復(fù)一次。
●根據(jù)您的實驗標(biāo)記可拆卸的8孔條。
●分別加入樣品和每個標(biāo)準(zhǔn)品100μl（參見試劑制備步驟3）到適當(dāng)?shù)陌蹇字小Ｉw上蓋子，室溫溫和振蕩孵育2.5小時
●棄去溶液，用1X洗滌液洗滌4次。使用多通道移液器或自動洗板機洗板，每孔加入洗滌緩沖液（300μl）。每個步驟中去除液體對于良好的性能是至關(guān)重要的。洗完后，通過吸取或傾析清除任何剩余的洗滌緩沖液。倒置板并用干凈的吸水紙吸干印跡。
●每孔加入100μl1X制備的*化抗體（試劑制備步驟6）。在室溫下溫和振蕩孵育1小時。
●棄去溶液。重復(fù)洗滌，如步驟4。
●加入100μl制備的鏈霉親和素溶液（見試劑制備步驟7）。在室溫下溫和搖動孵育45分鐘。
●棄去溶液。 重復(fù)洗滌，如步驟4。
●向每個孔中加入100μlTMB一步底物試劑（項目H）。在室溫下在黑暗中輕輕振蕩孵育30分鐘。
●向每個孔中加入50μl終止液（項目I）。 立即讀取450 nm處吸光度值。
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