自動(dòng)化微生物生化鑒定儀培養(yǎng)基檢測(cè)
自動(dòng)化微生物生化鑒定儀
HiBio-IDTM Reader (產(chǎn)品貨號(hào): LA686)
自動(dòng)化微生物生化鑒定儀培養(yǎng)基檢測(cè)
HiBio-IDTM Reader這款儀器是在KB試紙條出現(xiàn)的基礎(chǔ)上誕生的，能自動(dòng)化的完成微生物的鑒定。
HiBio-IDTM Reader的輔助元件：KB紙條及試劑（微生物生化鑒定試劑盒）、電源線、電腦連接導(dǎo)線、儀器箱。另外還需要電腦以及安裝HiBio-IDTM軟件。
微生物生化鑒定的發(fā)展歷程：
適合客戶領(lǐng)域：制藥、食品、飲用水、醫(yī)院。
準(zhǔn)確率高達(dá)99%，節(jié)省時(shí)間、節(jié)省勞力和材料。
尤其適合快速篩選大量樣本以檢測(cè)某一特定病原體的質(zhì)控項(xiàng)目。
快速、可靠、可重復(fù)、容易操作。
通過數(shù)據(jù)庫鑒定微生物
HiMedia自動(dòng)化微生物鑒定儀資料下載
HiBio-ID™微生物生化鑒定卡（貨號(hào) KB**）
HiBio-ID™ Reader 微生物生化鑒定儀（貨號(hào) LA686）
菌種的傳統(tǒng)鑒定方法,是通過生長過程中的生化反應(yīng)來鑒別。
HiBio-ID™微生物生化鑒定卡（貨號(hào) KB**）， 將12種或
24種縮微的生化反應(yīng)集成在一塊鑒定卡上，將反應(yīng)后的顯色
結(jié)果與《結(jié)果詮釋表》、《菌種標(biāo)準(zhǔn)表》比對(duì)后，完成鑒定。
HiBio-ID™ Reader 微生物生化鑒定儀（貨號(hào) LA686），
可對(duì)HiBio-ID™
生化鑒定卡更快速的讀取，一次可讀取5條。通過軟件對(duì)讀取結(jié)果計(jì)算分析，確定檢測(cè)的菌種。
HiBio-ID™ 系列產(chǎn)品 特點(diǎn)
1, HiBio-ID™系列產(chǎn)品，均采用以菌種擴(kuò)增為基礎(chǔ)的生化檢查來鑒定微生物（鑒定到種）。
?2, HiBio-ID™
Reader可自動(dòng)讀取鑒定卡的顯色結(jié)果，數(shù)據(jù)庫輔助完成鑒定。
?3, 實(shí)驗(yàn)表明，準(zhǔn)確率為90%~99%。
?4, 適用于快速、大量樣本篩查微生物的部門
?5, 快速、準(zhǔn)確、可重復(fù)，
6, 省時(shí)、省力、省材料。
HiBio-ID™生化鑒定卡設(shè)計(jì)的生化反應(yīng)的原理：
堿性磷酸酶試驗(yàn)：此試驗(yàn)檢測(cè)微生物產(chǎn)生堿性磷酸酶的能力。堿性磷酸酶使底物釋放*，*和堿（40%NaOH）反應(yīng)產(chǎn)生明亮的粉色。
?·氨基酸脫羧試驗(yàn)（賴氨酸、*、*）：該試驗(yàn)采用溴甲酚紫為pH值指示劑。培養(yǎng)基中存在糖發(fā)酵時(shí)，因產(chǎn)酸使pH值降低，培養(yǎng)基變黃。酸使脫羧酶激活。激活的脫羧酶使氨基酸脫羧生成胺，從而使培養(yǎng)基pH值升高，指示劑顏色從橄欖綠或亮紫色變?yōu)樽仙蛏钭仙ｊ幮苑磻?yīng)為黃色。存在賴氨酸和*脫羧時(shí)，孵育時(shí)間可能需要48小時(shí)。
?·糖代謝試驗(yàn)：該試驗(yàn)中酚紅為pH值指示劑。糖發(fā)酵產(chǎn)酸，pH值降低，產(chǎn)生黃色。顏色沒有變化或?yàn)榉?紅色，則為陰性反應(yīng)。一些菌在糖代謝試驗(yàn)中表現(xiàn)為弱反應(yīng)，這時(shí)應(yīng)再孵育48小時(shí)，若為橙色則為陰性反應(yīng)。
?·過氧化氫酶試驗(yàn)：產(chǎn)生過氧化氫酶的微生物能使過氧化氫降解為氧，表現(xiàn)為快速的氣泡產(chǎn)生。滴加1滴3％H2O2溶液即可用于檢測(cè)過氧化氫酶活性。
?·檸檬酸試驗(yàn)：培養(yǎng)基包含檸檬酸鹽（惟一的碳源）、溴*藍(lán)（指示劑）和無機(jī)銨鹽。利用檸檬酸鹽作為惟一碳源的有機(jī)體，也能利用銨鹽作為惟一的氮源。銨鹽分解產(chǎn)生NH3，導(dǎo)致堿性，指示劑從綠色變成藍(lán)色。
?·七葉苷水解試驗(yàn)：七葉苷可替代糖苷，可被一些菌水解產(chǎn)生葡萄糖和七葉苷原。后者和培養(yǎng)基中的鐵離子結(jié)合生成黑色復(fù)合物。
?·葡萄糖醛酸酶試驗(yàn)：葡萄糖醛酸酶能裂解培養(yǎng)基中的底物X-葡萄糖苷酸。該底物被微生物攝入后，發(fā)色團(tuán)和葡萄糖苷酸之間的化學(xué)鍵被細(xì)胞內(nèi)的葡萄糖醛酸酶裂解，釋放的發(fā)色團(tuán)產(chǎn)生藍(lán)綠色。
?·硫化氫產(chǎn)生試驗(yàn)：腸桿菌科的所有成員都能產(chǎn)生數(shù)量不等的H2S。這些微生物通過酶解方法，將硫從含硫氨基酸或無機(jī)硫化物中釋放出來。釋放的硫化氫和鐵離子或醋酸鉛反應(yīng)，產(chǎn)生硫化亞鐵或硫化鉛，形成不溶性黑色沉淀。培養(yǎng)基變黑為陽性反應(yīng)。
?·吲哚試驗(yàn)：該試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)菌分解*為吲哚的能力。吲哚在培養(yǎng)基中如果存在堆積，則滴加Kovac吲哚試劑會(huì)在10秒內(nèi)產(chǎn)生玫瑰紅色，表明為陽性反應(yīng)。
?·丙二酸代謝試驗(yàn)：該培養(yǎng)基用溴*藍(lán)為指示劑，丙二酸鈉為碳源，硫酸銨為氮源。丙二酸被有機(jī)體利用時(shí)，釋放出氫氧化鈉，導(dǎo)致堿性環(huán)境，使指示劑從淺綠色變?yōu)樗{(lán)色。陰性反應(yīng)則顏色不變。
?·甲基紅試驗(yàn)：該試驗(yàn)用甲基紅檢測(cè)有機(jī)體利用葡萄糖時(shí)產(chǎn)生的氫離子濃度（pH）。孵育結(jié)束時(shí)加入一滴甲基紅指示劑，如果顏色顯著變紅，則為陽性反應(yīng)。如果變黃或橙黃，則為陰性反應(yīng)。
?·硝酸鹽還原試驗(yàn)：革蘭氏陰性桿菌還原硝酸鹽的能力各有不同。腸桿菌科細(xì)菌均能特征性還原硝酸鹽為亞硝酸鹽。亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸和N，N-二甲基-1-萘胺試劑反應(yīng)，生成粉紅色。硝酸鹽試劑紙片（DD042）也可用于該試驗(yàn)。
?·ONPG試驗(yàn)：乳糖發(fā)酵需要通透酶和β-半乳糖苷酶這兩種酶。非乳糖發(fā)酵菌同時(shí)缺乏這兩種酶，而有些細(xì)菌有半乳糖苷酶，但缺乏通透酶。ONPG（鄰硝基酚-β-D-半乳糖苷）結(jié)構(gòu)上近似乳糖。存在Β-半乳糖苷酶時(shí)，ONPG裂解為半乳糖和鄰硝基酚（黃色化合物）。腸桿菌科成員通常根據(jù)它們發(fā)酵乳糖的能力進(jìn)行分類，因而ONPG試驗(yàn)在快速鑒定方面特別有用。黃色表明為陽性反應(yīng)。也可使用ONPG紙片（DD008）。在微生物生長8-24小時(shí)后放置ONPG紙片，35-37℃至少孵育1小時(shí)，出現(xiàn)黃色表明為陽性反應(yīng)。
?·氧化酶試驗(yàn)：該試驗(yàn)依賴于細(xì)菌內(nèi)存在催化電子供體間電子傳遞的氧化酶和一種氧還染料四甲基對(duì)苯二胺。染料被還原為深紫色。用氧化酶紙片（DD018）接觸生長菌表面或滴加Gordon-MaLeod試劑，5-10秒內(nèi)出現(xiàn)深紫色表明為陽性反應(yīng)。在10-60秒出現(xiàn)則為延遲的陽性反應(yīng)，顏色無變化為陰性反應(yīng)。
?·苯*脫氨基試驗(yàn)：此實(shí)驗(yàn)檢測(cè)微生物對(duì)苯*氧化脫氨的能力。該反應(yīng)產(chǎn)生苯丙酮酸，它和鐵鹽反應(yīng)產(chǎn)生綠色。滴加TDA試劑后為綠色則表明為陽性反應(yīng)。請(qǐng)?jiān)?分鐘內(nèi)讀取結(jié)果，因?yàn)榫G色很快會(huì)褪色。
?·PYR（吡咯烷酮酶）試驗(yàn)：革蘭氏陽性菌如釀膿鏈球菌和多數(shù)腸球菌合成吡咯烷酮芳基酰胺酶, 能水解吡咯烷酮-β萘基酰胺，釋放出無色的吡咯烷酮和β-萘基酰胺。PYR試劑與β-萘基酰胺作用形成紅色復(fù)合物。陽性反應(yīng)即為產(chǎn)生櫻桃紅至紅色。
?·耐鹽試驗(yàn)：一些微生物能耐受高濃度鹽分。生長培養(yǎng)基的氯化鈉濃度為1%時(shí)，即可用于檢測(cè)。
?·尿素酶試驗(yàn)：尿素酶分解尿素為氨。反應(yīng)為陽性時(shí)，培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，酚紅指示劑顯色為粉色。
?·伏-普試驗(yàn)：一些微生物通過葡萄糖代謝產(chǎn)生乙酰甲基甲醇。滴加1-2滴Barritt試劑A和1-2滴Barritt試劑B可進(jìn)行檢測(cè)。2-5分鐘內(nèi)產(chǎn)生粉紅色為陽性反應(yīng)。
HiBio-ID™
生化鑒定卡 操作流程
1，準(zhǔn)備接種液
①待測(cè)菌株需要先分離純化。只有純化的菌株才能用于檢測(cè)。可用普通培養(yǎng)基如營養(yǎng)瓊脂（#M001）或適合的鑒別培養(yǎng)基分離菌株。
②挑取單個(gè)菌落，接種到5ml腦心浸出液肉湯，在35-37℃培養(yǎng)4-6小時(shí)，直到菌液濁度達(dá)到產(chǎn)品說明書上的要求。一些苛養(yǎng)菌可能需要孵育6小時(shí)以上。在這種情況下，孵育應(yīng)使接種液濁度達(dá)到OD值或McFarland濁度標(biāo)準(zhǔn)。
③挑取1-3個(gè)完好分離的菌落，加入到2-3ml無菌鹽水中制成均一的懸濁液作為接種液。按照產(chǎn)品說明書的要求，調(diào)整懸濁液的密度。
④遵循產(chǎn)品說明書的要求操作。
注意：如果接種液濁度＜0.1OD或0.5 McFarland標(biāo)準(zhǔn)，可能會(huì)得到錯(cuò)誤的假陰性結(jié)果。
2，接種
①無菌打開試劑盒，撕去密封箔。
②采用表面接種方法，在鑒定卡上每孔加50l上述接種液。每孔用接種環(huán)涂抹接種。
3，孵育
HiBio-IDTM
生化鑒定卡中，貨號(hào)為KB001--KB014的產(chǎn)品，均在35℃±2℃培養(yǎng)18-24小時(shí)，只有KB006例外，需在室溫（22-25℃）孵育48-72小時(shí)。
4，試劑
必要時(shí)需要添加其他顯色試劑，更多細(xì)節(jié)參考結(jié)果詮釋表。
5，讀取結(jié)果
人工讀取結(jié)果：顯色結(jié)果與《結(jié)果詮釋表》比對(duì)，確定是否存在陽性反應(yīng)。再根據(jù)《菌種標(biāo)準(zhǔn)表》完成鑒定/或用HiBio-IDTM
Readers生化鑒定儀鑒定。
