小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)ELISA試劑盒
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- 公司名稱 上海古朵生物科技有限公司
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- 所在地 上海市
- 廠商性質(zhì) 代理商
- 更新時間 2019/1/16 9:49:17
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產(chǎn)品名稱:小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)ELISA 試劑盒
產(chǎn)品別名:小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)ELISA Kit
供應商:上海古朵
規(guī)格:48t/96t
保存:2~8℃
有效期:6個月
特點:敏感性高、特異性強、重復性好、試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便。
樣本:血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。
種屬:人、大鼠、小鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚等。
用途:用于測定血清,血漿及相關液體樣本中相關含量或活性。
檢測原理:采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。
運輸方式:現(xiàn)貨供應,一般為快遞運輸,江浙滬隔天到,外地及偏遠地方三至五天時間到貨。
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)ELISA試劑盒 樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。
2. 血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
特點:
1.專一性強??乖c抗體的免疫反應是專一反應,而免疫酶技術以免疫反應為基礎,所檢測的對象是抗原(或抗體),使用的抗體除標記了酶以外,與普通抗體的免疫反應特性并無多大差別。
2.靈敏度高。由于抗體聯(lián)結上了酶,因此,借助于酶與底物的顯色反應,顯示抗原與抗體的結合,大大提高了檢測的靈敏性,使檢測水平接近放射免疫測定法。
3.樣品易保存。經(jīng)過酶反應顯示的有色產(chǎn)物大多比較穩(wěn)定,因此有利于樣品的保存。
4.結果易觀察。對檢測結果即可用肉眼觀察,又可用顯微鏡觀察,也可以用分光光度計進行比色測定,還可用顯微鏡觀察。這是因為某些酶反應產(chǎn)物能使電子密度發(fā)生改變,從而引起被檢測物的顯示。
5.可以定量測定。溶液中的抗原物質(zhì),應用酶免吸附技術進行比色測定,依據(jù)光密度值的變化,可以定量。預計用細胞分光光度計可對組織內(nèi)的抗原進行免疫酶技術的定量測定。
6.可以大規(guī)模測定樣品。如有成千上萬份樣品需要進行檢測,免疫酶技術都能在較短時間內(nèi)完成。
7.儀器和試劑簡單。對免疫沒技術來說,不需要熒光顯微鏡,也不需要測定放射性的特殊儀器,所用儀器及試劑均屬一般性儀器與試劑,普通實驗室及生產(chǎn)應用單位均易購置.
操作步驟:
1.編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)
2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50?l。然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液 40?l,然后再加待測樣品 10?l。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 重復 5 次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標試劑 50?l,空白孔除外。
7.溫育:操作同 3。
8.洗滌:操作同 5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50?l,再加入顯色劑 B50?l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50?l,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
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