產(chǎn)品信息｜Certificate of Analysiss
rLys-C蛋白酶, 質(zhì)譜級(jí)
訂貨號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝
HLS LYS001C
20µg
HLS HAc001
rLys-C 蛋白酶
500µl
說(shuō)明: 質(zhì)譜級(jí)rLys-蛋白酶特異性水解在賴氨酸片段的C端的肽鍵?？捎糜谔岣邔?duì)不易水解的蛋白質(zhì)的消化; *在6-8M尿素溶液中進(jìn)行
物理形態(tài): 質(zhì)譜級(jí)rLys-C蛋白酶是凍干粉，含0.5mg海藻糖/瓶
分子量:27kDa.
溶解液（HLS HAc001C）：rLys-C蛋白酶復(fù)溶解緩沖液建議1mM鹽酸或50mM醋酸
儲(chǔ)存條件：凍干粉末存儲(chǔ)在-20℃冰箱，再溶解的酶儲(chǔ)存在-20℃。有效期見(jiàn)產(chǎn)品標(biāo)簽
保質(zhì)期：12月在-20℃
pH 值范圍: 在8-9 時(shí)，rLys-C 具有很好的活性
適用范圍：rLys-蛋白酶特異性水解變性后比較不易酶切的蛋白質(zhì)K位，*和Trypsin混合使用。
混合酶*SOP:
A. 通用溶液酶解法
100ug Trypsin/20ug rLys-C 混合酶按照 25:1 蛋白和蛋白酶的量(w/w)使用, 37°C恒溫過(guò)夜13-16小時(shí).
溫馨提示：尿素的濃度小于1M, 50mM Tris-HCl 緩沖溶液(pH 8)
B. 1+1步溶液酶解法
1. 100ug Trypsin/20ug rLys-C 混合酶按照25:1 蛋白和蛋白酶的量(w/w)使用, 37°C.恒溫酶解2-4小時(shí).
溫馨提示：尿素的濃度為6-8M, 50mM Tris-HCl 緩沖溶液(pH 8)
2. 稀釋上一步的溶液6倍，37°C恒溫過(guò)夜13-16小時(shí)
溫馨提示：尿素的濃度小于1M, 50mM Tris-HCl 緩沖溶液(pH 8)
質(zhì)量控制｜Quality Control
純度： 液相色譜280nm檢測(cè)雜質(zhì)蛋白質(zhì)峰強(qiáng)度，rLys-C峰強(qiáng)度大于99.9%
專一性：E.coli大腸桿菌樣品，ESI-MS/MS質(zhì)譜分析K端的專一性大于99.5%
活性:25unit/min/mg; 單位定義：rLys-c白蛋酶每分鐘酶切1.0 umole T-G-P Lys Nitroanilide的量，反應(yīng)條件：25℃，波長(zhǎng)405nm
Maldi TOF質(zhì)譜檢測(cè): 純化后的蛋白酶使用HCCA基質(zhì)激光解析質(zhì)譜分析未見(jiàn)雜質(zhì)蛋白質(zhì)峰
LC-MS/MS 質(zhì)譜分析: 使用rLys-c酶解HSA(人血清白蛋白，純度99.9%)實(shí)驗(yàn)，DTT還原，IAA保護(hù),PH8.0, 37°C恒溫過(guò)夜16小時(shí),液質(zhì)Q-E聯(lián)
用儀 分析，覆蓋率87%
