說(shuō)明: 質(zhì)譜級(jí)rTrypsin-N蛋白酶特異性水解在賴(lài)氨酸K和*R片段的N端的肽鍵。新的酶切N端的系列蛋白酶
物理形態(tài): 質(zhì)譜級(jí)rTrypsin-N蛋白酶是凍干粉，每瓶含有 0.47 mg HEPES; 0.05mg CaCL2
分子量: 29kDa.
溶解液: 建議使用超純水40ul溶解后使用， PH=7.5
儲(chǔ)存條件：凍干粉末存儲(chǔ)在-20℃冰箱，再溶解的酶儲(chǔ)存在-20℃或-80℃。有效期見(jiàn)產(chǎn)品標(biāo)簽
保質(zhì)期：24月在-80℃
pH 值范圍: 在PH7.5 時(shí)，rTrypsin-N 具有很好活性
適用范圍：rTrypsin-N蛋白酶特異性水解變性后蛋白質(zhì)K位和R位肽鍵。
通用溶液酶解法：
1. 蛋白酶*酶切體系：20-50mM HEPES或Tris 緩沖液
2.
使用條件：按照 20:1 蛋白和蛋白酶的量(w/w)使用, 37°C恒溫反應(yīng)4小時(shí)以上.
溫馨提示：
1.大活性：建議蛋白樣本經(jīng)過(guò)變性和烷基化處理后，同時(shí)嚴(yán)格執(zhí)行酶切反應(yīng)體系和SOP
2. 敏感性： 對(duì)1mM DTT, 0.1mM鹽酸胍, 0.8M尿素，5%乙腈 敏感，會(huì)降低酶切效率
質(zhì)量控制｜Quality Control
純度：液相色譜280nm檢測(cè)雜質(zhì)蛋白質(zhì)峰強(qiáng)度，rTrypsin-N峰強(qiáng)度大于99.0%
專(zhuān)一性: 人血清白蛋白HSA樣品，ESI-MS/MS質(zhì)譜分析R/K端的專(zhuān)一性大于95.0%
活性: 140unit/mg; 單位定義：r Trypsin N白蛋酶在366nm大光密度值半數(shù)時(shí)，酶切疊氮酪蛋白的單位量，反應(yīng)條件：37℃保溫30min，PH=10
Maldi TOF質(zhì)譜檢測(cè): 純化后的蛋白酶使用FA基質(zhì)激光解析質(zhì)譜分析未見(jiàn)雜質(zhì)蛋白質(zhì)峰
LC-MS/MS 質(zhì)譜分析: 使用rTrypsin N酶解HSA(人血清白蛋白，純度99.9%)實(shí)驗(yàn)，DTT還原，IAA保護(hù), PH7.5, 37°C恒溫酶切4小時(shí),液質(zhì)Q-E
聯(lián)用儀 分析，覆蓋率83%
