通過基因重組技術(shù)，將蛋白A與蛋白G基因重組于同一質(zhì)粒載體中，并在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)，得到分子量為50.5KDa的可溶性蛋白A/G。該可溶性蛋白A/G具有四個IgG結(jié)合位點，來自于蛋白A；和兩個IgG的結(jié)合位點，來自于蛋白G。因具有上述特性，使得基因工程重組蛋白A/G具有廣泛的IgG的結(jié)合能力，對各種哺乳類動物的IgG都能結(jié)合，使得該產(chǎn)品在IgG的診斷和純化中具有十分廣泛的用途。本產(chǎn)品采用“高配基、高濃度、小體積”的創(chuàng)新偶聯(lián)技術(shù)，將填料中有限的羥基(-OH)結(jié)合位點充分活化，使得單位體積中結(jié)合更多蛋白A/G，產(chǎn)品終純化效率較普通偶聯(lián)有30%的提高。蛋白A或蛋白G、蛋白A/G偶聯(lián)填料可直接用于血清、腹水中IgG抗體純化，或用于含F(xiàn)c片段的重組蛋白的純化。

l 產(chǎn)品技術(shù)指標(biāo)

    rec-Protein A/G per Sepharose 4FF 比值：4.0-4.5mg rec-Protein A/G per ml Sepharose 4FF

    rec-Protein AG分子量：50.5 KDa

    每分子rec-Protein G可結(jié)合IgG位點數(shù)：6個（4個來自于蛋白A，2個來自于蛋白G）

    rec-Protein A可結(jié)合白蛋白位點數(shù)：無

    線性流速：300-500 cm/h

   耐壓指數(shù)：≤0.3 MPa（填料）

l 注意事項
請在實驗前仔細(xì)閱讀本rProtein A預(yù)裝柱使用說明。同時，將所要的所有試劑、耗材拿出置于室溫，恢復(fù)至室溫使用。

l  產(chǎn)品保存
產(chǎn)品儲存于2-8℃，保質(zhì)期兩年。

l  rProtein A/G-Sepharose 4FF純化IgG抗體步驟

以下方法適用于從血清或腹水中純化IgG抗體，不同來源的IgG與rProteinA/ G的結(jié)合能力不同，具體情況請參考表1。

1. 將血清或腹水樣品（*上樣量2 mL樣品/mL柱）裝入截留分子量3.5 KDa透析帶中，于4 ℃冰箱中對1× PBS（pH 7.4）透析過夜；

2. 將rProtein A/G-Sepharose 4FF裝柱固定好，用10倍柱體積1× PBS（pH 7.4）平衡層析柱，建議流速為1 mL/min；

3. 將透析好的樣品從層析柱上端加入，建議流速為1 mL/min，為了獲得更好的抗體結(jié)合效果可將流穿液再上樣，重復(fù)2遍（或者是將樣品1次性加入層析柱后置于搖床上，輕輕搖動，結(jié)合30 min）；

4. 樣品結(jié)合后，用20倍柱體積1× PBS(pH 7.4)洗滌層析柱，建議流速為1 mL/min，勿讓層析柱滴干；

5. 洗脫IgG，向?qū)游鲋隙思尤胂疵撘海?00 mM*，pH 2.7），用預(yù)先加有100 μL中和緩沖液（1M Tris，pH 9.0）的4 mL Ep管接收，2 mL /管，共收集10倍柱體積，進(jìn)行10 % SDS-PAGE電泳，確定IgG樣品所在管，回收樣品。

6. 加入5倍柱體積再生緩沖液（100 mM*，pH 2.0），再加入10倍柱體積ddH2O清洗層析柱。 向?qū)游鲋尤?0倍柱體積, 20% Ethanol，于4~8 ℃冰箱。

表1 rProtein A/G 與Ig結(jié)合能力情況

表2 rProtein A/G預(yù)裝柱系列產(chǎn)品參數(shù)