一、離子交換層析

　　離子交換層析根據(jù)化合物的凈電荷進(jìn)行分離。帶負(fù)電荷或正電荷的官能團共價結(jié)合于固相載體基質(zhì)，分別成為陽離子交換劑和陰離子交換劑。當(dāng)一個帶電荷的分子加入到帶有相反電荷的交換劑時，它就會被吸附，同時，帶相同電荷的離子和中性分子則被洗脫到層析柱的外水體積里。帶電荷分子的結(jié)合是可逆的，通?？捎名}或PＨ梯度洗脫吸附的分子。

　離子交換層析可以有多種應(yīng)用，包括分離和純化生物分子，分離無機離子，試劑和水的去離子化，鹽轉(zhuǎn)換以及去除金屬離子、溴化乙錠和ＳＤＳ。

　兩性化合物的分離策略。如果分子在ＰＨ高于其等電點時穩(wěn)定，可使用陰離子交換樹脂。如果分子在ＰＨ低于其等電點時穩(wěn)定，則使用陽離子交換樹脂。

美國GE（原安瑪西亞）層析填料（常用型號）

二、親和層析

　　親和層析過程中，配體與待分離分子具有特定的親和力，共價結(jié)合于固體之上。樣品混合液加入到這些基質(zhì)形成的層析柱載體時，目標(biāo)分子（如蛋白、多肽、ＤＮＡ片段等）與固定在基質(zhì)上的配體結(jié)合，而混合液中不具親和力的組分則析出。通過改變ＰＨ值、濃鹽度、使用有機溶劑或加入與配體競爭性結(jié)合的分子，則可以將目標(biāo)分子洗脫下來。

美國GE（原安瑪西亞）層析填料（常用型號）

親和層析填料：

金屬螯合填料：

17-0920-07填料名稱：IMACSepharoseHighPerformance

17-0921-09填料名稱：IMACSepharose6FF

三、分子量排阻層析（又名分子篩層析、凝膠過濾層析）

分子量排阻層析（ＳＥＣ）又稱凝膠過濾層析，它根據(jù)分子量大小來分離分子。凝膠基質(zhì)由特定大小孔隙的球形小珠組成不同分子量的分子從孔中排阻通過，發(fā)生分離。小分子進(jìn)入孔內(nèi)，會延滯它們通過層析柱，而大分子避開孔，洗脫入層析柱外水體積。因此，樣品根據(jù)分子量大小進(jìn)行分離，并依照分子量遞減順序洗脫。

依據(jù)層析目的和所需的分辨率來選擇操作條件和介質(zhì)。分子量排阻層析中一種常規(guī)的方法為基團分離，包括：

脫鹽－目標(biāo)分子洗脫出來，而小分子保留在凝膠孔內(nèi)。為了獲得理想的分離，基質(zhì)的分子量排阻限度應(yīng)比目標(biāo)分子小。

分級分離-一定分子量范圍的分子在凝膠基質(zhì)內(nèi)分離。使用這種方法時，目標(biāo)分子應(yīng)當(dāng)在凝膠的分級分離范圍以內(nèi)。

分子量排阻層析常規(guī)應(yīng)用包括蛋白分級分離及分子量確定、核酸分離、質(zhì)粒純化和多糖分級分離。

層析分辨率取決于顆粒大小，孔徑大小、流速、層析柱尺寸和樣品體積。通常，低流速（2-10cm/hr）、細(xì)長柱、小顆粒凝膠、小樣品體積（總床體積的1-5%）、2倍的分子量差異以及相同的溶液粘度，可以獲得分辨率。如果用于脫鹽，様品體積則可達(dá)總床體積的30-40%，并可使用短粗柱。

美國GE（原安瑪西亞）層析填料（常用型號）

凝膠過濾填料：

四、疏水作用層析

疏水作用層析（HIC）根據(jù)化合物的疏水性進(jìn)行分離；帶有疏水和親水基團的樣品分子在高鹽緩沖液中加入到HIC層析柱，緩沖液中的鹽降低了樣品的溶解度。由于總?cè)芙舛认陆担懵对谕獾氖杷鶊F就被介質(zhì)吸附。化合物的疏水性越強，需要加入用來提高結(jié)合力的鹽就越少。通常依照疏水性的遞增次序，用遞減鹽梯度來洗脫層析柱內(nèi)的樣品，也可以在洗脫中加入溫和的有機調(diào)節(jié)物或洗滌劑來完成。

美國GE（原安瑪西亞）層析填料（常用型號）

疏水層析填料：

五、羥基磷灰石層析

羥基磷灰石（Ｃａ５（ＰＯ４）３ＯＨ）２是磷酸鈣的一種，對分離一些其它層析和電泳技術(shù)無法區(qū)分的蛋白具有*的選擇性和分辨率。羥基磷灰石層析適應(yīng)從初捕獲到完善的任何步驟。應(yīng)用于以下分離和純化：

·不同種類的單克隆和多克隆抗體·區(qū)分超螺旋與線性ＤＮＡ

·輕鏈組成不同的抗體·區(qū)分雙鏈ＤＮＡ與單鏈ＤＮＡ

·抗體片斷·病毒·同工酶