ECL化學(xué)發(fā)光底物（超敏）
產(chǎn)品簡介：
ECL超敏發(fā)光液用于檢測直接或間接標(biāo)記辣根過氧化物酶HRP的抗體及其關(guān)聯(lián)的抗原。
用途：用于HRP標(biāo)記抗體的Western Blot和HRP標(biāo)記探針的核酸雜交。
產(chǎn)品特點：
1、靈敏度高：可檢測低皮克級的蛋白；
2、信號持續(xù)時間長：光信號持續(xù)時間長達(dá)5小時；
3、穩(wěn)定試劑：工作液在24小時內(nèi)保持穩(wěn)定；
4、成像方法：適用于X射線膠片、CCD或激光凝膠成像儀；
5、價格經(jīng)濟(jì)：針對稀釋的抗體濃度條件進(jìn)行了優(yōu)化，節(jié)省抗體：
一抗：以1 mg/mL儲存液稀釋1:1,000至1:4,000倍
二抗：以1 mg/mL儲存液稀釋1:2,000至1:5,000倍
6、簡單易用：可替代其它公司的ECL發(fā)光底物，操作步驟無需進(jìn)行特別優(yōu)化；
使用方法:
1、執(zhí)行常規(guī)SDS-PAGE、轉(zhuǎn)膜和Western Blot步驟。注意用HRP標(biāo)記IgG或用一抗-鏈親和素-*-HRP夾法。
2、 Western Blot*后一次洗膜的同時新鮮配制發(fā)光工作液：分別取等體積的溶液A和B，放入干凈容器中混合。建議立即使用工作液，室溫放置數(shù)小時后仍可使用但靈敏度略有降低。
3、 用鑷子取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜*干燥。將膜*浸入發(fā)光工作液（0.125mL發(fā)光工作液/cm2膜）中，與發(fā)光工作液充分接觸。室溫孵育3分鐘，準(zhǔn)備立即壓片曝光。孵育時間過長不會增加靈敏度，有時還會導(dǎo)致曝光條帶異常。發(fā)光過程的本質(zhì)是酶促反應(yīng)，使用過少的發(fā)光工作液不利反應(yīng)進(jìn)行，也會導(dǎo)致膜上條帶曝光不均和明顯降低靈敏度。為達(dá)節(jié)約目的可將膜剪小但勿降低發(fā)光液用量。
4、 用鑷子夾起膜，搭在濾紙上瀝干發(fā)光工作液。但勿洗去發(fā)光液。
5、 打開X光膠片暗盒，在暗盒內(nèi)表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將Western Blot膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來*包裹Western Blot膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋Western Blot膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi)，蛋白帶面向上。
6、 暗房內(nèi)壓X光膠片，分別曝光不同的時間，如數(shù)秒到數(shù)分鐘。顯影沖洗。建議第*次曝光 60 秒，之后可調(diào)整曝光時間以達(dá)到*佳結(jié)果?；瘜W(xué)發(fā)光反應(yīng)在底物孵育后的前 5-30 min期間是*強(qiáng)烈的。這一反應(yīng)可以持續(xù)幾個小時，但強(qiáng)度會隨時間下降，如有底物孵育后較長時間后曝光，曝光時間可能需要延長以獲得較強(qiáng)信號。
注意事項：
（1）步驟1～5可在日光燈下操作；但發(fā)光液曝露于強(qiáng)光下時間過久靈敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免之。
（2）長時間曝光或蛋白過量，將加深背景并使條帶強(qiáng)弱變化失去線性關(guān)系。曝光不足則條帶模糊。
（3）發(fā)光工作液孵育約3分鐘后膜上的條帶發(fā)光。強(qiáng)條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見，低豐度蛋白條帶發(fā)光較弱甚至肉眼不可見但可使X光膠片曝光。肉眼不可見的熒光實際上可持續(xù)數(shù)小時并使X光膠片感光，因而弱帶可曝光1-10小時。如果曝光后條帶不佳，可用洗膜緩沖液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL發(fā)光和曝光。
（4）由于超敏發(fā)光液極其靈敏，建議按照推薦比例稀釋抗體?？贵w濃度過高將造成高背景或沒有條帶，導(dǎo)致失敗。
（5）某些保鮮膜包裹印跡膜時可能會淬滅熒光，應(yīng)選擇高質(zhì)量保鮮膜。
（6）使用肉眼可見的預(yù)染色蛋白Marker和熒光-放射自顯影曝光標(biāo)簽可精確確定膠片上條帶的位置和大小。
（7）疊氮鈉是 HRP 的抑制物，不要使用疊氮鈉作為緩沖液的防腐劑。
保存條件：
室溫運(yùn)輸，4 ℃密封避光保存一年，短期可放置室溫。
