詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
丙二醛(MDA)含量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明:
氧自由基作用于脂質(zhì)的不飽和脂肪酸,生成過(guò)氧化脂質(zhì);后者逐漸分解為一系列復(fù)雜的化合物,其中包括丙二醛(MDA)。通過(guò)檢測(cè) MDA 的水平即可檢測(cè)脂質(zhì)氧化的水平。丙二醛(MDA)在酸性和高溫條件下,可以與硫代*比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)縮合,生成棕紅色的三甲川,其最大吸收波長(zhǎng)在 532nm。進(jìn)行比色后可估測(cè)樣本中 MDA 的含量。
注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。
需自備的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋/金屬浴、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
丙二醛(MDA)含量檢測(cè)試劑盒注意事項(xiàng):
若發(fā)現(xiàn)檢測(cè)樣本吸光值過(guò)低,可以將沸水浴時(shí)間 60min 調(diào)整為 90min 或者更長(zhǎng),但同一實(shí)驗(yàn)中的 MDA 的檢測(cè)都需要延長(zhǎng)到同一時(shí)間以免引起誤差。
樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))
1、 細(xì)菌或細(xì)胞樣本的制備:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、 組織樣本的制備:稱(chēng)取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液進(jìn)行冰浴勻漿;8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
3、 低、中脂血血清(漿)等液體樣本:直接檢測(cè)。
4、 高脂血或者油脂類(lèi)樣本:取 40μL 樣本和 80μL 無(wú)水乙醇混合(即樣本被稀釋 3 倍),渦旋震蕩 5min 后使用。不同高脂肪類(lèi)樣本可能會(huì)有不同的稀釋倍數(shù),可以稀釋不同倍數(shù)進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)以確定最佳稀釋倍數(shù)。同時(shí)操作表中空白管的蒸餾水應(yīng)以(33μL 蒸餾水+67μL 乙醇)代替。