MTT/細(xì)胞毒性/增殖檢測試劑盒產(chǎn)品簡介:
MTT 可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成結(jié)晶狀的深紫色產(chǎn)物 formazan,在特定溶劑存在的情況下,可以被溶解,然后通過酶標(biāo)儀可以測定 490nm 波長附近的吸光度。細(xì)胞增殖越多越快,則吸光度越高;細(xì)胞毒性越大,則吸光度越低。
使用說明:
1.收集對數(shù)期細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞懸液濃度,分于 96 孔板,每孔 180μL,3000-10000 個(gè)細(xì)胞/孔。
2.置 37℃、5%CO2 溫箱培養(yǎng)使細(xì)胞貼壁,培養(yǎng) 6-24 小時(shí)。
3.加入適當(dāng)濃度的受試化合物,繼續(xù)培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間。
4.小心吸去上清,加入 90μL 新鮮培養(yǎng)液,再加入 10μL MTT 溶液,繼續(xù)培養(yǎng) 4 h。
5.然后吸掉上清,每孔加入 110μL Formazan 溶解液,置搖床上低速振蕩 10 min,使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀 490 nm 處測量各孔的吸光值。
6.同時(shí)設(shè)置調(diào)零孔(培養(yǎng)基、MTT、 Formazan 溶解液),對照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、 Formazan 溶解液),每組設(shè)定 3 復(fù)孔。
MTT/細(xì)胞毒性/增殖檢測試劑盒注意事項(xiàng):
1.由于使用 96 孔板進(jìn)行檢測,如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長,一定要注意蒸發(fā)的問題。一方面,由于96 孔板周圍一圈最容易蒸發(fā),可以采取棄用周圍一圈的辦法,改加 PBS,水或培養(yǎng)液;另一方面,可以把 96 孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方,以緩解蒸發(fā)。
2.MTT 溶液為黃色需避光保存,長時(shí)間光照會(huì)導(dǎo)致失效。當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時(shí),請勿使用。Formazan 溶解液結(jié)凍或產(chǎn)生沉淀時(shí)可以 37℃水浴孵育以促進(jìn)溶解,并且必須在全部溶解并混勻后使用。
3.為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。