膠原蛋白Ⅰ型(可溶) 常用溶液
膠原蛋白Ⅰ型(可溶) 常用溶液
最佳的包被濃度取決于細(xì)胞類型以及應(yīng)用或研究目的。
1. 用 0.1M 醋酸溶液溶解膠原蛋白,配置濃度為 0.1%(w/v)膠原蛋白儲(chǔ)存液。室溫?cái)嚢?/p>
1-3h 直至膠原蛋白完丨全溶解。
2. 取一無菌玻璃瓶,在瓶底部鋪上一層氯仿,將膠原蛋白溶液轉(zhuǎn)移到氯仿上層,氯仿體積
為膠原蛋白溶液的 10%,不能震蕩或攪拌。2-8℃靜置過夜。將上層膠原蛋白溶液轉(zhuǎn)移
至無菌容器中(無菌操作)。若采用濾膜過濾除菌,會(huì)導(dǎo)致蛋白量損失。
3. 根據(jù)包被面積計(jì)算所需包被液體積;將 0.1%的膠原蛋白儲(chǔ)存液進(jìn)行 10 倍比例稀釋,配
制成 0.01%的工作濃度。
4. 以 6-10ug/cm2 濃度向細(xì)胞培養(yǎng)皿中加入膠原蛋白工作液,完丨全覆蓋表面即可。
5. 室溫或 37℃放置數(shù)小時(shí),或者 2-8℃過夜。
6. 吸去多余液體,讓培養(yǎng)皿干燥過夜。干燥包被好的培養(yǎng)皿表面可以經(jīng)過 UV 照射過夜滅
菌。
7. 再接種細(xì)胞前可以用無菌的平衡丨鹽溶液洗滌細(xì)胞培養(yǎng)皿表面。
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