膠原酶V 常用溶液
膠原酶V 常用溶液產(chǎn)品說明:
膠原酶Ⅴ包含至少 7 種蛋白酶成分,分子量從 68-130KD 不等。它可用于胰腺小島組織的分離,將結(jié)締組織分離成單個細(xì)胞。消化軟骨組織的濃度一般為 1-2 mg/ml,消化肝臟組織大約 1 mg/ml。但是具體的消化濃度因種屬特異性而異。很多文獻(xiàn)指出膠原酶可以消化多種組織,膠原酶的使用濃度一般為 0.1- 5 mg/ml,消化過程中可以攪拌以促進酶的消化作用。膠原酶在消化的過程中可以引起細(xì)胞的少量死亡,一般消化時間為 15min 至數(shù)小時。如果濃度發(fā)生變化那么消化時間可能更長。消化過程中緩沖液為含鈣離子和 BSA 的 Krebs Ringer Buffer。
在消化的過程中如果細(xì)胞大量死亡則需要降低酶量,同時可以加入0.5%BSA或5-10%血清來穩(wěn)定細(xì)胞的狀態(tài)和消化效果。膠原酶的滅菌首先離心或者用0.8μm的濾器去掉不溶物。然后再用0.2μm的濾器過濾除菌。
對于組織培養(yǎng)方面的應(yīng)用,膠原酶可以用不含鈣離子的溶液配制如hanks,ebss等。
酶保存液:0.05 - 0.1 mg/ml 膠原酶溶于50 mM TES buffer,pH 7.4 (37 ℃) 含 0.36 mM 氯化鈣。反應(yīng)體系的終濃度為50 mM TES,0.36 mM 氯化鈣,25 mg 膠原,0.005-0.01 mg 膠原酶。
穩(wěn)定性:酶液在含有 0.3-0.5 mM 鈣離子的中性 PH 條件下可以在 37 ℃維持活性 5 小時。在-20℃可以維持?jǐn)?shù)月。