X-gal溶液 (20mg/ml)產(chǎn)品說明:
IPTG 為安慰性誘導物,X-gal 為生色底物,二者共同用于藍白斑篩選。IPTG 可誘導載體 Lac 操縱子 DNA 區(qū)段合成β-半乳糖苷酶氨基端片段,該片段可與宿主細胞編碼的缺陷型β-半乳糖苷酶實現(xiàn)基因內(nèi)互補(α互補)。實現(xiàn)α互補的細菌鋪在含有 X-gal 生色底物的培養(yǎng)基上,可形成藍色菌落。外源DNA 插入質(zhì)粒的多克隆位點后可破壞α互補作用,將產(chǎn)生白色菌落。
X-gal溶液 (20mg/ml)使用說明:(僅供參考)
藍白色篩選:
(1)在 100mL 的瓊脂培養(yǎng)基中,加入 500μL 的 X-gal 溶液(20mg/mL)、250μL 的 IPTG 溶液(50mg/mL)和 100μL 的 Amp 溶液(氨芐青丨霉素 100 mg/mL),制作成含 X-Gal、IPTG 和 Amp 的平板培養(yǎng)基。高壓滅菌后的培養(yǎng)基需冷卻至 55℃以下時加入 X-gal、IPTG 和 Amp,以防失活。
(2)實際上 X-gal 和 IPTG 可以直接涂抹在平板培養(yǎng)基表面, 90mM 的平板,X-gal(20mg/mL)涂 40μL,IPTG(50mg/mL)涂 16μL。150mm 的平板加倍,待涂布的液體干后即可使用。細菌鋪板后,37℃培養(yǎng)過夜,可根據(jù)長出菌落的藍白色,而方便地挑選出基因重組體(白色菌落為具有 DNA插入片段的基因重組體)。
注意事項:為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。