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革蘭氏染色法指的是細(xì)菌學(xué)中被廣泛用來鑒別細(xì)菌的一種方法。最初是一位丹麥醫(yī)生漢斯·克里斯蒂安·革蘭用來鑒別肺炎球菌和克雷白氏肺炎菌，在后續(xù)不斷推廣下，現(xiàn)在成為了鑒別細(xì)菌種類的重要特性之一。通過觀察染色后的細(xì)菌，根據(jù)染色后細(xì)菌呈現(xiàn)的顏色可以分為革蘭氏陽性細(xì)菌和革蘭氏陰性細(xì)菌，陽性細(xì)菌呈紫色，陰性細(xì)菌呈紅色，并且還能夠清楚地觀察到細(xì)菌的的形態(tài)、排列組合以及某些結(jié)構(gòu)特征的不同，通過這些特性再進(jìn)行分類鑒定。
革蘭氏染色法的染色原理是由于陽性細(xì)菌和陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁組成結(jié)構(gòu)和成分上有所差異，染色體的反應(yīng)也不同，陽性菌的細(xì)胞壁肽聚糖層厚，其肽聚糖網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)之間交聯(lián)緊密，經(jīng)過乙醇脫色處理后會(huì)發(fā)生脫水情況，導(dǎo)致陽性菌的孔徑縮小，使得通透性能降低，結(jié)晶紫與碘形成的大分子復(fù)合物就會(huì)保留在細(xì)胞壁內(nèi)不脫色，細(xì)胞最終呈現(xiàn)紫色；陰性菌的肽聚糖層比較薄，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)之間的交聯(lián)松散，且脂類含量高，經(jīng)過乙醇脫色處理后，乙醇將類脂溶解，細(xì)胞壁的孔徑變大，通透性增強(qiáng)，細(xì)胞壁上會(huì)出現(xiàn)較大的縫隙，使結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物容易溶出細(xì)胞壁，導(dǎo)致細(xì)胞脫色，細(xì)胞呈無色狀態(tài)，這時(shí)再用紅色染料對(duì)細(xì)胞進(jìn)行復(fù)染，革蘭氏陰性細(xì)菌最終呈紅色狀態(tài)。
革蘭氏染色的實(shí)驗(yàn)步驟
1.制片：選取菌種培養(yǎng)物中常規(guī)涂片，干燥后再進(jìn)行固定，步驟與簡單染色法相同；
2.初染：滴加草酸銨結(jié)晶紫，染色1-2min后進(jìn)行水洗；
3.媒染：用碘液去除殘留的水分，并用碘液覆蓋約1min后再進(jìn)行水洗；
4.脫色：用濾紙將殘水吸去，滴加95%的酒精，大約25-30s，直到乙醇不再流出紫色時(shí)，立刻進(jìn)行水洗；
5.復(fù)染：用番紅液復(fù)染1-2min，再次水洗；
6.鏡檢：標(biāo)本片干燥后，用油鏡進(jìn)行觀察，菌體被染成紅色的即為革蘭氏陰性菌，被染成紫色的即為革蘭氏陽性菌。
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