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流式細胞儀的基本結(jié)構(gòu)

   2022年03月21日 08:57  
  流式細胞儀是對細胞進行自動分析和分選的裝置。它可以快速測量、存貯、顯示懸浮在液體中的分散細胞的一系列重要的生物物理、生物化學方面的特征參量,并可以根據(jù)預選的參量范圍把特定的細胞亞群從中分選出來。
 
  流式細胞儀主要由四部分組成。它們是:流動室和液流系統(tǒng)、激光源和光學系統(tǒng)、光電管和檢測系統(tǒng)、計算機和分析系統(tǒng)。
 
  流動室和液流系統(tǒng)
 
  流動室由樣品管、鞘液管和噴嘴等組成,常用光學玻璃、石英等透明、穩(wěn)定的材料制作。設(shè)計和制作均很精細,是液流系統(tǒng)的心臟。樣品管貯放樣品,單個細胞懸液在液流壓力作用下從樣品管射出;鞘液由鞘液管從四周流向噴孔,包圍在樣品外周后從噴嘴射出。為了保證液流是穩(wěn)液,一般限制液流速度υ<10m/s。由于鞘液的作用,被檢測細胞被限制在液流的軸線上。流動室上裝有壓電晶體,受到振蕩信號可發(fā)生振動。
 
  激光源和光學系統(tǒng)
 
  經(jīng)特異熒光染色的細胞需要合適的光源照射激發(fā)才能發(fā)出熒光供收集檢測。常用的光源有弧光燈和激光;激光器又以氬離子激光器為普遍,也有配和氪離子激光器或染料激光器。光源的選擇主要根據(jù)被激發(fā)物質(zhì)的激發(fā)光譜而定。汞燈是常用的弧光燈,其發(fā)射光譜大部分集中于300~400nm,很適合需要用紫外光激發(fā)的場合。氬離子激光器的發(fā)射光譜中,綠光514nm和藍光488nm的譜線*,約占總光強的80%;氪離子激光器光譜多集中在可見光部分,以647nm較強。免疫學上使用的一些熒光染料激發(fā)光波長在550nm以上,可使用染料激光器。將有機染料做為激光器泵浦的一種成份,可使原激光器的光譜發(fā)生改變以適應需要即構(gòu)成染料激光器。
 
  光電管和檢測系統(tǒng)
 
  經(jīng)熒光染色的細胞受合適的光激發(fā)后所產(chǎn)生的熒光是通過光電轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)變成電信號而進行測量的。光電倍增管(PMT)最為常用。PMT的響應時間短,僅為ns數(shù)量級;光譜響應特性好,在200~900nm的光譜區(qū),光量子產(chǎn)額都比較高。光電倍增管的增益從10到10可連續(xù)調(diào)節(jié) ,因此對弱光測量十分有利。光電管運行時特別要注意穩(wěn)定性問題,工作電壓要十分穩(wěn)定,工作電流及功率不能太大。一般功耗低于0.5W;最大陽極電流在幾個毫安。此外要注意對光電管進行暗適應處理,并注意良好的磁屏蔽。在使用中還要注意安裝位置不同的PMT,因為光譜響應特性不同,不宜互換。也有用硅光電二極管的,它在強光下穩(wěn)定性比PMT好。
 
  從PMT輸出的電信號仍然較弱,需要經(jīng)過放大后才能輸入分析儀器。流式細胞計中一般備有兩類放大器。一類是輸出信號輻度與輸入信號成線性關(guān)系,稱為線性放大器。線性放大器適用于在較小范圍內(nèi)變化的信號以及代表生物學線性過程的信號,例DNA測量等。另一類是對數(shù)放大器,輸出信號和輸入信號之間成常用對數(shù)關(guān)系。在免疫學測量中常使用對數(shù)放大器。因為在免疫分析時常要同時顯示陰性、陽性和強陽性三個亞群,它們的熒光強度相差1~2個數(shù)量級;而且在多色免疫熒光測量中,用對數(shù)放大器采集數(shù)據(jù)易于解釋。此外還有調(diào)節(jié) 便利、細胞群體分布形狀不易受外界工作條件影響等優(yōu)點。
 
  計算機和分析系統(tǒng)
 
  經(jīng)放大后的電信號被送往計算機分析器。多道的道數(shù)是和電信號的脈沖高度相對應的,也是和光信號的強弱相關(guān)的。對應道數(shù)年縱坐標通常代表發(fā)出該信號的細胞相對數(shù)目。多道分析器出來的信號再經(jīng)模-數(shù)轉(zhuǎn)換器輸往微機處理器編成數(shù)據(jù)文件,或存貯于計算機的硬盤和軟盤上,或存于儀器內(nèi)以備調(diào)用。計算機的存貯容量較大,可存貯同一細胞的6~8個參數(shù)。存貯于計算機內(nèi)的數(shù)據(jù)可以在實測后脫機重現(xiàn),進行數(shù)據(jù)處理和分析,最后給出結(jié)果。除上述四個主要部分外,還備有電源及壓縮氣體等附加裝置。

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