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一、實驗目的

　　1、了解無菌操作

　　2、掌握培養(yǎng)基母液的配制方法

　　二、實驗原理

　　配制培養(yǎng)及時，為了使用方便和用量準確，通常采用母液法進行配制，即將所選培養(yǎng)基配方中各試劑的用量，擴大若干倍后再準確稱量，分別先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用時按比例吸取母液進行稀釋配制即可。

　　三、實驗器材和藥品

　　1、器材：電子天平、燒杯、容量瓶、細口瓶、藥勺、玻璃棒、電爐。

　　2、藥品：NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、FeSO4·7H2O、Na2-EDTA·2H2O、肌醇、煙yan

　　四、實驗步驟

　　1、大量元素母液的配制

　　各成分按照表1培養(yǎng)基濃度含量擴大10倍用天平稱取，用蒸餾水分別溶解，按順序逐步混合。后用蒸餾水定容到1000ml的容量瓶中，即為10倍的大量元素母液。到入細口瓶，貼好標簽保存于冰箱中。配制培養(yǎng)基時，每配1L培養(yǎng)基取此液100ml。

　　表1 MS培養(yǎng)基大量元素母液制備

　　注意：

　　(1)配制大量元素母液時，某些無機成分如Ca2+、SO42－、Mg 2+和H2PO4一等在一起可能發(fā)生化學反應，產(chǎn)生沉淀物。為避免此現(xiàn)象發(fā)生，母液配制時要用純度高的重蒸餾水溶解，藥品采用等級較高的分析純，各種化學藥品必須先以少量重蒸餾水使其充分溶解后才能混合，混合時應注意先后順序。特別應將Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等離子錯開混合，速度宜慢，邊攪拌邊混合。

　　(2)CaCl2·2H2O要在最后單獨加入，在溶解CaCl2·2H2O時，蒸餾水需加熱沸騰，除去水中的CO2，以防沉淀。另外，CaCl2·2H2O放入沸水中易沸騰，操作時要防止其溢出。

　　2、微量元素母液的配制

　　MS培養(yǎng)基的微量元素無機鹽由7種化合物（除Fe）組成。微量元素用量較少，特別是CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O，因此在配制中分微量Ⅰ、Ⅱ配制。按照表2，表3配方，用電光天平稱量，其它同大量元素。配制培養(yǎng)基時，每配制1L培養(yǎng)基，取微量Ⅰ10ml，微量Ⅱ0.1ml。

　　表2 MS培養(yǎng)基微量Ⅰ的配制

　　表3 MS培養(yǎng)基微量Ⅱ的配制

　　注意：

　　使用電子分析天平時注意不要把藥品撒到稱盤上，用完以后，用吸耳球?qū)⑻炱絻?nèi)的臟物清理干凈。

　　3、鐵鹽母液的配制

　　鐵鹽不是都需要單獨配成母液，如檸檬酸鐵，只需和大量元素一起配成母液即可。目前常用的鐵鹽是硫shua亞yie和乙二胺四乙酸二鈉的螯合物，必須單獨配成母液。這種螯合物使用起來方便，又比較穩(wěn)定，不易發(fā)生沉淀。配制方法同上，直接用蒸餾水加熱攪拌溶解，定容至1L。配制培養(yǎng)基時，配制1L取此液10ml。

　　表4 MS鐵鹽母液的配制

　　注意：

　　在配制鐵鹽時，如果加熱攪拌時間過短，會造成FeS04和Na2-EDTA鰲合不che底，此時若將其冷藏，F(xiàn)eSO4會結晶析出。為避免此現(xiàn)象發(fā)生，配制鐵鹽母液時，F(xiàn)eSO4和Na2-EDTA應分別加熱溶解后混合，并置于加熱攪拌器上不斷攪拌至溶液呈金黃色(約加熱20-30 min)，調(diào)pH值至5.5，室溫放置冷卻后，再冷藏。

　　4、有機母液的配制

　　MS培養(yǎng)基的有機成分有甘an酸、肌醇、煙suan、鹽酸硫胺素和鹽酸吡哆素。培養(yǎng)基中的有機成分原則上應分別單獨配制。配制直接用蒸餾水溶解，定容至1L，注意稱量時用電子分析天平。配制培養(yǎng)基時，每配1L培養(yǎng)基取此液5ml。

　　注意：

　　由于維生素母液營養(yǎng)豐富，因此貯藏時極易染菌。被菌類污染的維生素母液，有效濃度降低，并且易給后期培養(yǎng)造成傷害，不宜再用。避免此現(xiàn)象發(fā)生的方法是:配制母液時用無菌重蒸餾水溶解維生素，并貯存在棕色無菌瓶中，或縮短貯藏時間。

　　表5 MS培養(yǎng)基有機物質(zhì)母液的制備

　　5、激素母液配制

　　植物組織培養(yǎng)中使用的激素種類及含量需要根據(jù)不同的研究目的而定。一般激素母液的配制的終濃度以0.5mg/ml為好，需要注意的是：

　　(1)配制生長素類，例如IAA、NAA、2.4-D、6BA，應先用少量95%乙醇或無水乙醇充分溶解，或者用1mol/L的NaOH溶解，然后用蒸餾水定容到一定的濃度。

　　(2)細胞分裂素，例如KT，應先用少量95%乙醇或無水乙醇加3~4滴1mol/L的鹽酸溶解，再用蒸餾水定容。

　　(3)配制生wu素，用稀氨水溶解，然后定容。

　　注意：

　　所有的母液都應保存在0~4℃冰箱中，若母液出現(xiàn)沉淀或霉團則不能繼續(xù)使用。