酶-重量法1.原理:樣品分別用α-*、蛋白酶、葡萄糖苷酶進行酶解消化以去除蛋白質(zhì)和可消化的淀粉??偵攀忱w維(TDF)是先酶解,然后用乙醇沉淀,再將沉淀物過濾,將TDF殘渣用乙醇和丙酮沖洗,干燥稱重。不溶性和可溶性膳食纖維(IDF和SDF)是酶解后將IDF過濾,過濾后的殘渣用熱水沖洗,經(jīng)干燥后稱重。SDF是將上述濾出液用4倍量的95%乙醇沉淀,然后再過濾,干燥,稱重。 TDF、IDF和SDF量通過蛋白質(zhì)、灰分含量進行校正。2.適用范圍AOAC991.43 本方法適用于各類植物性食物和保健食品。3.儀器3.1燒杯:400或600ml高腳型。3.2 過濾用坩堝:玻料濾板,美國試驗和材料學(xué)會(ASTM)40-60μm,Pyrex 60ml(Corning No.36060 buchner,或同等的)。如下處理:(1) 在灰化爐525℃灰化過夜。爐溫降至130℃以下取出坩堝。(2) 用真空裝置移出硅藻土和灰質(zhì)。(3) 室溫下用2%清洗溶液浸泡1小時。(4) 用水和去離子水沖洗坩堝;然后用15ml丙酮沖洗然后風(fēng)干。(5) 在干燥的坩堝中加0.5g硅藻土,在130℃烘干恒重。(6) 在干燥器中冷卻1小時,記錄坩堝加硅藻土重量,至0.1mg。3.3 真空裝置:(1) 真空泵或抽氣機作為控制裝置。(2) 1L的厚壁抽濾瓶。(3) 與抽濾瓶相配套的橡皮圈。3.4振蕩水浴箱:(1) 自動控溫使溫度能保持在98±2℃。(2) 恒溫控制在60℃。3.5 天平:分析級,至±0.1mg。3.6馬福爐:溫度控制在525±5℃。3.7干燥箱:溫度控制在105和130±3℃。3.8干燥器:用二氧化硅或同等的干燥劑。干燥劑兩周一次在130℃烘干過夜。3.9 PH計:注意溫控,用pH4.0、7.0和10.0緩沖液標(biāo)化。3.10 移液管及套頭:容量100μl和5ml。3.11 分配器或量筒:(1) 15±0.5ml,供分配78%的乙醇,95%的乙醇以及丙酮。(2) 40±0.5ml,供分配緩沖液。3.12. 磁力攪拌器和攪拌棒。4. 試劑全過程使用去離子水,試劑不加說明均為分析純試劑4.1 乙醇溶液:(1) 85%:加895ml95%乙醇在1L量筒中,用水稀釋至刻度。(2) 78%:加821ml95%乙醇在1L量筒中,用水稀釋至刻度。4.2 丙酮:4.3 供分析用酶:在0-5℃下儲存。(1) 熱穩(wěn)定α-*溶液:Cat. No. A3306,Sigma Chemical Co.,St. Louis,MO63178,或 Termamyl 300L,Cat. No. 361-6282,Novo-Nordisk,Bagsvaerd,Denmark,或等效的酶。(2) 蛋白酶:Cat. No. P3910,Sigma Chemical Co.,或等效的。當(dāng)天用MES/TRIS緩沖液中現(xiàn)配50mg/ml酶溶液。(3) 淀粉葡糖苷酶溶液:Cat. No. AMG A9913,Sigma Chemical Co.,或等效的。4.4 硅藻土:酸洗(Celite 545 AW,No.C8656,Sigma Chemical Co.,或等效的)。4.5 洗滌液:兩者挑一。(1) 鉻酸:120g重各酸鈉Na2Cr2O7·2H2O,1000ml蒸餾水和1600ml濃硫酸。(2) 實驗室用液體清潔劑,預(yù)備急需清洗的(Micro,International Products Corp.,Trenton,NJ08016,或等效的)。用水配制2%溶液。4.6 MES-TRIS緩沖液:0.05mol/L,溫度在24℃時pH值為8.2。(1) MES:2-(N-嗎啉代)磺酸基乙烷(No.M-8250,Sigma Chemical Co.或等效的)。(2) TRIS:三羥(羥甲基)氨基甲烷(No.T-1503,Sigma Chemical Co.或等效的)。在1.7L的蒸餾水中溶解19.52gMES和12.2gTRIS,用6mol/L NaOH調(diào)pH到8.2,用水定容至2L。(注意:24℃時的pH為8.2,但是,如果緩沖液溫度在20℃,pH就為8.3,如果溫度在28℃,pH為8.1。為了使溫度在20-28℃之間,需根據(jù)溫度調(diào)整pH值。)4.7 鹽酸溶液:0.561mol//L,加93.5ml6mol/L鹽酸到700ml水中,用水定容至1L。
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