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膳食纖維的測定方法

來源:河南省達蘭科技有限公司   2014年11月08日 18:12  

-重量法1.原理:樣品分別用α-*、蛋白酶、葡萄糖苷酶進行酶解消化以去除蛋白質(zhì)和可消化的淀粉??偵攀忱w維(TDF)是先酶解,然后用乙醇沉淀,再將沉淀物過濾,將TDF殘渣用乙醇和丙酮沖洗,干燥稱重。不溶性和可溶性膳食纖維(IDFSDF)是酶解后將IDF過濾,過濾后的殘渣用熱水沖洗,經(jīng)干燥后稱重。SDF是將上述濾出液用4倍量的95%乙醇沉淀,然后再過濾,干燥,稱重。 TDF、IDFSDF量通過蛋白質(zhì)、灰分含量進行校正。2.適用范圍AOAC991.43 本方法適用于各類植物性食物和保健食品。3.儀器3.1燒杯:400600ml高腳型。3.2 過濾用坩堝:玻料濾板,美國試驗和材料學(xué)會(ASTM40-60μm,Pyrex 60mlCorning No.36060 buchner,或同等的)。如下處理:1 在灰化爐525灰化過夜。爐溫降至130以下取出坩堝。2 用真空裝置移出硅藻土和灰質(zhì)。3 室溫下用2%清洗溶液浸泡1小時。4 用水和去離子水沖洗坩堝;然后用15ml丙酮沖洗然后風(fēng)干。5 在干燥的坩堝中加0.5g硅藻土,在130烘干恒重。6 在干燥器中冷卻1小時,記錄坩堝加硅藻土重量,至0.1mg。3.3 真空裝置:1 真空泵或抽氣機作為控制裝置。2 1L的厚壁抽濾瓶。3 與抽濾瓶相配套的橡皮圈。3.4振蕩水浴箱:1 自動控溫使溫度能保持在98±2。2 恒溫控制在603.5 天平:分析級,至±0.1mg3.6馬福爐:溫度控制在525±5。3.7干燥箱:溫度控制在105130±3。3.8干燥器:用二氧化硅或同等的干燥劑。干燥劑兩周一次在130烘干過夜。3.9 PH計:注意溫控,用pH4.0、7.010.0緩沖液標(biāo)化。3.10 移液管及套頭:容量100μl5ml。3.11 分配器或量筒:1 15±0.5ml,供分配78%的乙醇,95%的乙醇以及丙酮。2 40±0.5ml,供分配緩沖液。3.12. 磁力攪拌器和攪拌棒。4. 試劑全過程使用去離子水,試劑不加說明均為分析純試劑4.1 乙醇溶液:1 85%:加895ml95%乙醇在1L量筒中,用水稀釋至刻度。2 78%:加821ml95%乙醇在1L量筒中,用水稀釋至刻度。4.2 丙酮:4.3 供分析用酶:在0-5下儲存。1 熱穩(wěn)定α-*溶液:Cat. No. A3306,Sigma Chemical Co.,St. Louis,MO63178,或 Termamyl 300L,Cat. No. 361-6282,Novo-NordiskBagsvaerdDenmark,或等效的酶。2 蛋白酶:Cat. No. P3910Sigma Chemical Co.,或等效的。當(dāng)天用MES/TRIS緩沖液中現(xiàn)配50mg/ml酶溶液。3 淀粉葡糖苷酶溶液:Cat. No. AMG A9913,Sigma Chemical Co.,或等效的。4.4 硅藻土:酸洗(Celite 545 AW,No.C8656,Sigma Chemical Co.,或等效的)。4.5 洗滌液:兩者挑一。1 鉻酸:120g重各酸鈉Na2Cr2O7·2H2O,1000ml蒸餾水和1600ml濃硫酸。2 實驗室用液體清潔劑,預(yù)備急需清洗的(MicroInternational Products Corp.,Trenton,NJ08016,或等效的)。用水配制2%溶液。4.6 MES-TRIS緩沖液:0.05mol/L,溫度在24pH值為8.2。1 MES2-N-嗎啉代)磺酸基乙烷(No.M-8250Sigma Chemical Co.或等效的)。2 TRIS:三羥(羥甲基)氨基甲烷(No.T-1503Sigma Chemical Co.或等效的)。1.7L的蒸餾水中溶解19.52gMES12.2gTRIS,用6mol/L NaOH調(diào)pH8.2,用水定容至2L。(注意:24時的pH8.2,但是,如果緩沖液溫度在20,pH就為8.3,如果溫度在28,pH8.1。為了使溫度在20-28之間,需根據(jù)溫度調(diào)整pH值。)4.7 鹽酸溶液:0.561mol//L,加93.5ml6mol/L鹽酸到700ml水中,用水定容至1L。

 

 

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