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簡單的總結(jié)和收集了一些關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)中，常出現(xiàn)的些技術(shù)問題，希望對大家有幫助：

1. 液體培養(yǎng)基的保存是冷藏好？還是冷凍好？
  要冷藏??！因?yàn)橐后w培養(yǎng)基經(jīng)冷凍后再經(jīng)溶化時，其溶液的pH值會發(fā)生改變，溶液往往變堿，某些成分溶解也會受到影響對細(xì)胞生長不利。故液體培養(yǎng)基一定要存放在冷藏箱中，通常液體培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個月 ~ 一年。

2. 液體培養(yǎng)基中*的作用，及使用方法。
  幾乎所有的細(xì)胞對*有較高的要求，細(xì)胞需要*合成蛋白質(zhì)，在缺少*時，細(xì)胞生長不良而死亡。所以，各種培養(yǎng)液中都含有較大量的*。*在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)置-20 ?C冰凍保存，用前加入培養(yǎng)基中。加有*的液體培養(yǎng)基4 ?C 冰箱儲存兩周以上時，應(yīng)重新加入原來量的*。基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)細(xì)胞中心在其服務(wù)項目中配制分裝了高濃度（100倍）的*溶液（1ml/支）。每支1ml的*加到99ml*培養(yǎng)基中，其終濃度為2mM/ml培養(yǎng)基。包裝為粉紅色，-24?C保存。

3.培養(yǎng)用液pH對細(xì)胞生長的影響
   由于，大多數(shù)細(xì)胞適宜pH為7.2~7.4，偏離此范圍對細(xì)胞將產(chǎn)生有害的影響。各種細(xì)胞對pH的要求也不*相同，原代培養(yǎng)細(xì)胞一般對pH變動耐受差，無限細(xì)胞系耐受力強(qiáng)。
但總體來說，細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些，偏酸環(huán)境中更利于細(xì)胞生長。因此，我們在配制培養(yǎng)用液時，可把液體的pH稍微調(diào)得偏酸一些。液體在經(jīng)過0.10um或0.22um濾膜過濾時，溶液的pH還會向上浮動0.2左右。

4．原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的概念

從機(jī)體上獲取的組織，通過酶或機(jī)械方法分散成單個細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，在傳代前的培養(yǎng)一般稱為原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)的zui大優(yōu)點(diǎn)是：組織細(xì)胞剛脫離機(jī)體，生物性狀尚未發(fā)生較大變化，在一定程度上能夠反映體內(nèi)的狀態(tài)。原代培養(yǎng)的細(xì)胞在生長、繁殖一定時間后，由于空間不足或細(xì)胞密度過大導(dǎo)致營養(yǎng)枯竭，會影響細(xì)胞的生長，因此需要進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，即傳代或稱為傳代培養(yǎng)，也就是將細(xì)胞按1：2~1：4的比例傳代。但嚴(yán)格說來，不論在進(jìn)行傳代時稀釋與否，將細(xì)胞從一個培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到另一個培養(yǎng)瓶即稱為傳代培養(yǎng)。

傳代代數(shù)與細(xì)胞的世代（增殖代數(shù)）并不是同一個概念。在細(xì)胞培養(yǎng)時，所說的“第10代細(xì)胞”，僅指該細(xì)胞已經(jīng)傳代10次；細(xì)胞傳一代后，一般能倍增3~6次，經(jīng)過三個階段，即潛伏期、指數(shù)生長期和平臺期。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到平臺期時，就需要進(jìn)行傳代培養(yǎng)，否則細(xì)胞會中毒，發(fā)生形態(tài)改變，甚至死亡。

5．關(guān)于傳代培養(yǎng)

在進(jìn)行傳代時，如果是懸浮細(xì)胞，只需簡單稀釋即可，若需*更換培養(yǎng)液只需低速離心沉淀，再懸浮于合適的培養(yǎng)液中即可。一般細(xì)胞每毫升接種數(shù)量為5´10⁴~8´10⁵個，傳代密度太低，細(xì)胞容易死亡，表現(xiàn)出細(xì)胞在達(dá)到增長前有較長的滯留期。在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)液會由于pH下降而呈現(xiàn)黃色，表明細(xì)胞已經(jīng)達(dá)到zui大密度需要換液或進(jìn)行傳代培養(yǎng)。如果是單層貼壁的細(xì)胞，等長滿培養(yǎng)瓶表面，即可進(jìn)行傳代，多數(shù)細(xì)胞需用*處理將細(xì)胞從生長物表面分離下來，以促進(jìn)傳代培養(yǎng)。

6．細(xì)胞系和細(xì)胞株

細(xì)胞系和細(xì)胞株，兩者曾一度混用，導(dǎo)致有些文獻(xiàn)中概念不清。下面所指的概念是現(xiàn)在國內(nèi)外比較通用的，也是絕大多數(shù)研究者接受的觀點(diǎn)。

原代培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功即稱為細(xì)胞系（Cell Line），因此細(xì)胞系可泛指一般可能傳代的細(xì)胞。其中能夠連續(xù)傳代的細(xì)胞叫做連續(xù)細(xì)胞系或無限細(xì)胞系，不能連續(xù)培養(yǎng)的稱為有限細(xì)胞系。大多數(shù)二倍體細(xì)胞為有限細(xì)胞系。通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的培養(yǎng)物稱為細(xì)胞株（Cell Strain），也就是說，細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。

7。細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境要求：

無污染環(huán)境：培養(yǎng)環(huán)境無毒和無菌是保證細(xì)胞生存的首要條件。當(dāng)細(xì)胞放置于體外培養(yǎng)時，與體內(nèi)相比細(xì)胞丟失了對微生物和有毒物的防御能力，一旦被污染或自身 代謝物質(zhì)積累等，可導(dǎo)致細(xì)胞死亡。因此在進(jìn)行培養(yǎng)中，保持細(xì)胞生存環(huán)境無污染、代謝物及時清除等，是維持細(xì)胞生存的基本條件。

恒定的溫度：維持培養(yǎng)細(xì)胞旺盛生長，必須有恒定適宜的溫度。人體細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為 36.5℃±0.5℃，偏離這一溫度范圍，細(xì)胞的正常代謝會受到影響，甚至死亡。培養(yǎng)細(xì)胞對低溫的耐受力較對高溫強(qiáng)，溫度上升不超過39℃時，細(xì)胞代謝與 溫度成正比；人體細(xì)胞在39-40℃1小時，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復(fù)；在40-41℃1小時，細(xì)胞會普遍受到損傷，僅小半數(shù)有可能恢 復(fù)；41-42℃1小時，細(xì)胞受到嚴(yán)重?fù)p傷，大部分細(xì)胞死亡，個別細(xì)胞仍有恢復(fù)可能；當(dāng)溫度在43℃以上1小時，細(xì)胞全部死亡。

氣體環(huán)境：氣體是人體細(xì)胞培養(yǎng)生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環(huán)，產(chǎn)生供給細(xì)胞生長增殖的能量和合成細(xì)胞生長所需用的 各種成分。 開放培養(yǎng)時一般把細(xì)胞置于 95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中。