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氣相色譜柱在石油、化工、生物化學(xué)、醫(yī)藥衛(wèi)生、食品工業(yè)、環(huán)保等方面應(yīng)用很廣。它除用于定量和定性分析外,還能測(cè)定樣品在固定相上的分配系數(shù)、活度系數(shù)、分子量和比表面積等物理化學(xué)常數(shù)。一種對(duì)混合氣體中各組成分進(jìn)行分析檢測(cè)的儀器。
一、在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中經(jīng)常遇到的問(wèn)題:
新的色譜柱,直接上分析條件來(lái)分析樣品,發(fā)現(xiàn)分離情況不穩(wěn)定。
新的色譜柱,使用中發(fā)現(xiàn)壓力突然升高。
新的色譜柱,發(fā)現(xiàn)分離度、保留時(shí)間發(fā)生了變化。
色譜柱使用不頻繁,一開(kāi)始分析樣品效果比較好,但是,在使用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)柱效下降快、峰形異常的情況。
色譜峰形異常,基線不穩(wěn)。
二、發(fā)生問(wèn)題的解決方法:
1、測(cè)試柱性能
通常情況下,我們建議用戶在拿到色譜柱后,*件事情就是在一臺(tái)性能完好的儀器系統(tǒng)上,按照廠家說(shuō)明書(shū)對(duì)色譜柱進(jìn)行柱效測(cè)試。其實(shí),對(duì)于一個(gè)合格的色譜分析工作者來(lái)說(shuō),拿到一根新色譜柱,要開(kāi)始一個(gè)課題之前,都會(huì)這樣做,目的有二:一、了解色譜柱之前的情況并判斷色譜柱是否正常。二、將檢測(cè)結(jié)果小心保存,當(dāng)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)異常時(shí),在檢測(cè)柱效進(jìn)行對(duì)比,來(lái)進(jìn)一步排查原因。
2、當(dāng)反相使用高濃度緩沖鹽時(shí),注意過(guò)渡
在使用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑時(shí),一定要注意應(yīng)先用10%左右的低濃度的有機(jī)相洗脫劑過(guò)渡一下,否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機(jī)相中很容易析出,造成系統(tǒng)堵塞。另外,在發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)壓力升高異常時(shí),要仔細(xì)檢查,段段排除包括保護(hù)柱、混合器、管路或者流通池等。色譜柱的維護(hù)和保養(yǎng)
3、當(dāng)更換色譜柱時(shí),原來(lái)的實(shí)驗(yàn)情況發(fā)生變化
首先,如果之前開(kāi)發(fā)方法時(shí)色譜柱已經(jīng)做過(guò)別的樣品,那么之前的樣品或使用的流動(dòng)相對(duì)這個(gè)樣品分析可能有干擾,只能重新找條件。建議:開(kāi)發(fā)方法時(shí)使用新的色譜柱。(其次,如果是更換了品牌發(fā)生這樣的情況,可能是由于不同品牌的鍵合技術(shù)不同,造成了選擇性的細(xì)微差異,需要調(diào)整條件,并再次確定出峰順序(有些樣品的洗脫順序會(huì)改變)。
再次,如果是更換了同品牌型號(hào)的新的色譜柱發(fā)生這種情況,請(qǐng)檢查之前分離時(shí)目標(biāo)與雜質(zhì)的分離度是否符合要求(Rs大于1.5),如果一開(kāi)始只是勉強(qiáng)分開(kāi)(Rs小于1.5),那只能說(shuō)明方法沒(méi)有優(yōu)化好,需要再次進(jìn)行優(yōu)化。色譜柱的維護(hù)和保養(yǎng)
4、樣品及前處理
樣品要盡可能清潔,可選用樣品過(guò)濾器或樣品預(yù)處理柱(SPE)對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理;若樣品不便處理,要使用保護(hù)柱。流動(dòng)相中所使用的各種有機(jī)溶劑要使用色譜純,配流動(dòng)相的水是超純水或雙蒸水。如果將所配得流動(dòng)相再經(jīng)過(guò)0.45μm的濾膜過(guò)濾一次則更好,尤其是含鹽的流動(dòng)相。另外,裝流動(dòng)相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過(guò)濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換。
5、色譜柱基線問(wèn)題
通常情況,基線問(wèn)題是由于系統(tǒng)或者流動(dòng)相引起的,和色譜柱關(guān)系不大。
三、可能導(dǎo)致的原因:
1、泵頭進(jìn)氣泡
2、系統(tǒng)污染
3、流通池漏液
4、流動(dòng)相使用的某成分易揮發(fā)不穩(wěn)定(檢測(cè)波長(zhǎng)不合適)
5、檢測(cè)波長(zhǎng)低,水的質(zhì)量不好等等。
6、色譜柱沖洗保養(yǎng)
當(dāng)使用了緩沖液或含鹽的流動(dòng)相,實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)用10%的甲醇水溶液沖洗30分鐘,洗掉色譜柱中的鹽,再用甲醇沖洗30分鐘。注意:不能用純水沖洗柱子,應(yīng)該在水中加入至少10%的甲醇,防止將填料沖塌陷。還有就是不能在這個(gè)工作上面打折扣,否則,一些保留強(qiáng)的雜質(zhì)沒(méi)有洗脫下來(lái),只能是給后面的工作帶來(lái)更大的麻煩。如色譜柱要長(zhǎng)時(shí)間保存,可以儲(chǔ)存于純甲醇或乙腈中,并將購(gòu)買(mǎi)新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上。儲(chǔ)存的溫度是室溫。
一、在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中經(jīng)常遇到的問(wèn)題:
新的色譜柱,直接上分析條件來(lái)分析樣品,發(fā)現(xiàn)分離情況不穩(wěn)定。
新的色譜柱,使用中發(fā)現(xiàn)壓力突然升高。
新的色譜柱,發(fā)現(xiàn)分離度、保留時(shí)間發(fā)生了變化。
色譜柱使用不頻繁,一開(kāi)始分析樣品效果比較好,但是,在使用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)柱效下降快、峰形異常的情況。
色譜峰形異常,基線不穩(wěn)。
二、發(fā)生問(wèn)題的解決方法:
1、測(cè)試柱性能
通常情況下,我們建議用戶在拿到色譜柱后,*件事情就是在一臺(tái)性能完好的儀器系統(tǒng)上,按照廠家說(shuō)明書(shū)對(duì)色譜柱進(jìn)行柱效測(cè)試。其實(shí),對(duì)于一個(gè)合格的色譜分析工作者來(lái)說(shuō),拿到一根新色譜柱,要開(kāi)始一個(gè)課題之前,都會(huì)這樣做,目的有二:一、了解色譜柱之前的情況并判斷色譜柱是否正常。二、將檢測(cè)結(jié)果小心保存,當(dāng)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)異常時(shí),在檢測(cè)柱效進(jìn)行對(duì)比,來(lái)進(jìn)一步排查原因。
2、當(dāng)反相使用高濃度緩沖鹽時(shí),注意過(guò)渡
在使用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑時(shí),一定要注意應(yīng)先用10%左右的低濃度的有機(jī)相洗脫劑過(guò)渡一下,否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機(jī)相中很容易析出,造成系統(tǒng)堵塞。另外,在發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)壓力升高異常時(shí),要仔細(xì)檢查,段段排除包括保護(hù)柱、混合器、管路或者流通池等。色譜柱的維護(hù)和保養(yǎng)
3、當(dāng)更換色譜柱時(shí),原來(lái)的實(shí)驗(yàn)情況發(fā)生變化
首先,如果之前開(kāi)發(fā)方法時(shí)色譜柱已經(jīng)做過(guò)別的樣品,那么之前的樣品或使用的流動(dòng)相對(duì)這個(gè)樣品分析可能有干擾,只能重新找條件。建議:開(kāi)發(fā)方法時(shí)使用新的色譜柱。(其次,如果是更換了品牌發(fā)生這樣的情況,可能是由于不同品牌的鍵合技術(shù)不同,造成了選擇性的細(xì)微差異,需要調(diào)整條件,并再次確定出峰順序(有些樣品的洗脫順序會(huì)改變)。
再次,如果是更換了同品牌型號(hào)的新的色譜柱發(fā)生這種情況,請(qǐng)檢查之前分離時(shí)目標(biāo)與雜質(zhì)的分離度是否符合要求(Rs大于1.5),如果一開(kāi)始只是勉強(qiáng)分開(kāi)(Rs小于1.5),那只能說(shuō)明方法沒(méi)有優(yōu)化好,需要再次進(jìn)行優(yōu)化。色譜柱的維護(hù)和保養(yǎng)
4、樣品及前處理
樣品要盡可能清潔,可選用樣品過(guò)濾器或樣品預(yù)處理柱(SPE)對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理;若樣品不便處理,要使用保護(hù)柱。流動(dòng)相中所使用的各種有機(jī)溶劑要使用色譜純,配流動(dòng)相的水是超純水或雙蒸水。如果將所配得流動(dòng)相再經(jīng)過(guò)0.45μm的濾膜過(guò)濾一次則更好,尤其是含鹽的流動(dòng)相。另外,裝流動(dòng)相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過(guò)濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換。
5、色譜柱基線問(wèn)題
通常情況,基線問(wèn)題是由于系統(tǒng)或者流動(dòng)相引起的,和色譜柱關(guān)系不大。
三、可能導(dǎo)致的原因:
1、泵頭進(jìn)氣泡
2、系統(tǒng)污染
3、流通池漏液
4、流動(dòng)相使用的某成分易揮發(fā)不穩(wěn)定(檢測(cè)波長(zhǎng)不合適)
5、檢測(cè)波長(zhǎng)低,水的質(zhì)量不好等等。
6、色譜柱沖洗保養(yǎng)
當(dāng)使用了緩沖液或含鹽的流動(dòng)相,實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)用10%的甲醇水溶液沖洗30分鐘,洗掉色譜柱中的鹽,再用甲醇沖洗30分鐘。注意:不能用純水沖洗柱子,應(yīng)該在水中加入至少10%的甲醇,防止將填料沖塌陷。還有就是不能在這個(gè)工作上面打折扣,否則,一些保留強(qiáng)的雜質(zhì)沒(méi)有洗脫下來(lái),只能是給后面的工作帶來(lái)更大的麻煩。如色譜柱要長(zhǎng)時(shí)間保存,可以儲(chǔ)存于純甲醇或乙腈中,并將購(gòu)買(mǎi)新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上。儲(chǔ)存的溫度是室溫。
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