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【中國儀器網(wǎng) 使用手冊】高速逆流色譜是20世紀80年代發(fā)展起來的一種連續(xù)的液—液分配色譜分離技術(shù)，它不用任何固態(tài)的支撐物或載體。儀器利用兩相溶劑體系在高速旋轉(zhuǎn)的螺旋管內(nèi)建立起一種特殊的單向性流體動力學平衡，當其中一相作為固定相，另一相作為流動相，在連續(xù)洗脫的過程中能保留大量固定相。
今天小編就帶大家了解一下高速逆流色譜的操作步驟。
1. 配液。超聲脫氣約20min，脫氣后靜置冷卻至室溫后泵液。
2. 打開恒溫水浴，將溫度升至設(shè)定溫度。
3. 泵固定相。以10～20ml/min流速泵入固定相，檢測器出口端流出固定相約20～50ml后停泵。
4. 平衡。打開紫外檢測器開始預(yù)熱，正轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)動主機至900rpm(FWD為正轉(zhuǎn)，REV為反轉(zhuǎn))，同時以3ml/min流速泵入流動相，至出口端流出流動相且此時紫外信號穩(wěn)定，體系基本已平衡。
5.進樣。以體系上下相溶解一定量的樣品，超聲溶解均勻后，在裝樣注射器中倒入樣品溶液，將進樣六通閥切換至load，推排氣泡后吸液至樣品全進入進樣圈中，將load切換至inject，檢測器、工作站調(diào)零開始記錄。
6. 接收流分。工作站記錄，設(shè)備運行時間為500min，保存后采集數(shù)據(jù)，保存。
7.清洗。斷開泵與主機的連接，將主機進口與氣管出口連接，吹氣；將主機中溶劑吹出后，泵入約50ml清洗液，吹氣，重復此過程2～3次；后一次長時間(1小時左右直至吹干)吹氣時將主機內(nèi)液體吹盡。
8.關(guān)機。
高速逆流色譜相對于傳統(tǒng)的固—液柱色譜技術(shù)，具有適用范圍廣、操作靈活、、快速、制備量大、費用低等優(yōu)點。目前廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)藥、天然產(chǎn)物、食品和化妝品等領(lǐng)域，特別在天然產(chǎn)物行業(yè)中已被認為是一種有效的新型分離技術(shù);適合于中小分子類物質(zhì)的分離純化。
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